大鼠乳腺成纖維細胞采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,。大鼠乳腺成纖維細胞分離自乳腺組織；乳腺位于皮下淺筋膜的淺層與深層之間,，淺筋膜伸向乳腺組織內(nèi)形成條索狀的小葉間隔,，一端連于胸肌筋膜，另一端連于皮膚,，將乳腺腺體固定在胸部的皮下組織之中,。乳腺是哺乳動物少數(shù)可以重復(fù)經(jīng)歷生長、功能分化和退化過程的器官之一,。纖維結(jié)締組織伸入乳腺組織之間,，形成許多間隔，這些纖維結(jié)締組織對乳房起固定作用,，而纖維結(jié)締組織是由成纖維細胞構(gòu)成的,。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來,。成纖維細胞較大,，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,，細胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細胞對不同程度的細胞變性,、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的乳腺成纖維細胞呈圓形,、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁,，伸展成梭形,，胞核清晰，分布較均勻,，散在生長,，不聚集成團；細胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài),，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長,，平坦,、胞體較大，細胞質(zhì)透明,，細胞核較大,，呈橢圓形,，顏色淡,。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。

1.吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3.用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4.待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基,。

備注：由于實驗所用試劑,、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實驗室參考

客戶在細胞培養(yǎng)過程中,，有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務(wù)電話： 按 2,，我們隨時給予解答。

1.培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2.在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作,。

3.傳代培養(yǎng)過程中,，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。