大鼠骨細胞采用膠原酶消化法制備而來,。大鼠骨細胞分離自骨組織,；骨組織的細胞成分包括骨原細胞、成骨細胞,、骨細胞和破骨細胞,。只有骨細胞存在于骨組織內(nèi)，其他三種細胞均位于骨組織的邊緣,。骨細胞（Osteocyte）是人體骨骼中最主要的細胞成分,。在成年人骨骼中，骨細胞占細胞總數(shù)量的90%～95%,，大約是成骨細胞數(shù)量的20倍,。骨細胞生長在骨骼內(nèi)部的骨基質(zhì)中。骨細胞的細胞體呈梭形或類圓形,，位于基質(zhì)構(gòu)成的骨陷窩內(nèi),。與神經(jīng)細胞類似，每個骨細胞具有大量向外延伸的突觸,，而這些突觸均位于由骨基質(zhì)構(gòu)成的骨小管結(jié)構(gòu)中,。通過這些突觸，骨細胞能夠與骨表面的細胞,、周圍其它的骨細胞進行“交流”,。普遍認為，骨細胞起源于成骨細胞,。在骨形成的終末階段,，成骨細胞將可能有3種不同的歸宿：分化成為骨細胞、轉(zhuǎn)移至骨表面成為暫不活動的成骨細胞,、進入程序死亡過程（凋亡）,。骨細胞為扁橢圓形多突起的細胞，核亦扁圓,、染色深,。胞質(zhì)弱嗜堿性。電鏡下,，胞質(zhì)內(nèi)有少量溶酶體,、線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng),，高爾基復合體亦不發(fā)達。骨細胞夾在相鄰兩層骨板間或分散排列于骨板內(nèi),。相鄰骨細胞的突起之間有縫隙連接,。在骨基質(zhì)中，骨細胞胞體所占據(jù)的橢圓形小腔,，稱為骨陷窩,，其突起所在的空間稱骨小管。相鄰的骨陷窩借骨小管彼此通連,。骨陷窩和骨小管內(nèi)均含有組織液，骨細胞從中獲得養(yǎng)分,。骨細胞是成熟骨組織中的主要細胞,，相當于人的成年期，由骨母細胞轉(zhuǎn)化而來,。當新骨基質(zhì)鈣化后,，細胞被包埋在其中。此時細胞的合成活動停止,，胞漿減少,，成為骨細胞。骨細胞能產(chǎn)生新的基質(zhì),，改變晶體液,，使骨組織鈣、磷沉積和釋放處于穩(wěn)定狀態(tài),，以維持血鈣平衡,。骨細胞對骨吸收和骨形成都起作用，是維持成熟骨新陳代謝的主要細胞,。骨細胞夾在相鄰兩層骨板間或分散排列于骨板內(nèi),。相鄰骨細胞的突起之間有縫隙連接。

1.吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次,；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4.待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基,。

備注：由于實驗所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,，以上方法僅供各實驗室參考

客戶在細胞培養(yǎng)過程中,，有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務電話： 按 2，我們隨時給予解答,。

1.培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2.在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作,。

3.傳代培養(yǎng)過程中，消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。