流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)原理

待測樣品(如細(xì)胞,、染色體、精子或細(xì)菌等)經(jīng)熒光染料染色后制成樣品懸液,，在一定壓力下通過殼液包圍 的進(jìn)樣管而進(jìn)入流動(dòng)室,，排成單列的細(xì)胞，由流動(dòng)室的噴嘴噴出而成為細(xì)胞液流,，并與入射激光束相交,。 細(xì)胞被激發(fā)而產(chǎn)生熒光，由放在與入射的激光束和細(xì)胞液流成 90°處的光學(xué)系統(tǒng)收集之,。光學(xué)系統(tǒng)中的阻 斷濾片用于阻擋激發(fā)光,；二色分光鏡及另一些阻斷濾片則用于選擇熒光波長。熒光檢測器為光電倍增管,。 散射光檢測器是光電二極管,，用以收集前向散射光。小角度前向散射與細(xì)胞大小有關(guān),。

整個(gè)儀器用多道脈沖高度分析器處理熒光脈沖信號(hào)和光散射信號(hào),。測定的結(jié)果用單參數(shù)直方圖、雙參數(shù)散點(diǎn)圖,、三維立體圖和輪廓（等高）圖來表示,。

對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分選的原理是，由超聲振蕩器產(chǎn)生高頻振蕩,，使流動(dòng)室發(fā)生振動(dòng),，把噴嘴噴出的細(xì)胞液流斷裂成一連串的均勻小液滴,，有的液滴含有細(xì)胞。這些細(xì)胞在形成液滴前,，光學(xué)系統(tǒng)已測定了它們的信號(hào)（代表細(xì)胞的性質(zhì)）,，如果測得信號(hào)與所選定的要進(jìn)行分選的細(xì)胞性質(zhì)符合，或者說,，如果發(fā)現(xiàn)了要進(jìn)行分選的細(xì)胞時(shí)則在這個(gè)選定細(xì)胞剛形成液滴時(shí),，儀器給整個(gè)液流充以短暫的正或負(fù)電荷。當(dāng)該液滴離開液流后,，其中被選定細(xì)胞的液滴就帶有電荷，而不被選定的細(xì)胞液滴則不帶電,。帶有正電或負(fù)電的液滴通過高壓偏轉(zhuǎn)板時(shí)發(fā)生向陰極或向陽極的偏轉(zhuǎn),，從而達(dá)到了分類收集細(xì)胞的目的。

1,、檢測指標(biāo)： DNA倍體分析,、DNA含量分析、細(xì)胞周期,、細(xì)胞凋亡,；細(xì)胞表面抗原分析：淋巴細(xì)胞免疫分型、白血病及淋巴瘤免疫分型,、血小板相關(guān)抗體分析,、PNH相關(guān)抗原檢測（CD55/CD59）、胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測等,。

2,、樣本及來源：

1) 細(xì)胞數(shù)量達(dá)到檢測所需（細(xì)胞周期1x106、細(xì)胞凋亡3x106）,生長良好,，無污染,，附有細(xì)胞生長照片， 注明實(shí)驗(yàn)檢測項(xiàng)目所需試劑盒,；來源于人,、小鼠、大鼠或其它,。

2) 外周血：EDTA或肝素抗凝全血,，5ml左右；來源于人,、小鼠,、大鼠或其它。

3）試劑：部分常用熒光探針,，如PI等,，我公司可免費(fèi)提供,；特殊標(biāo)記物，如CD抗體等,，用戶須另行購買,，我公司可以代購；用戶所提供抗體應(yīng)可與樣本發(fā)生特異性識(shí)別反應(yīng),。

4）樣品包裝要求：細(xì)胞培養(yǎng)在培養(yǎng)瓶中或操作前樣本于合適的條件保存,。

檢測說明：

1、用戶需要進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測時(shí)須提前預(yù)約,，同時(shí)說明實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、方法等。zui低收費(fèi)300元,。

2,、我公司在正式接受實(shí)驗(yàn)委托一周內(nèi)交付實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所提供實(shí)驗(yàn)結(jié)果忠實(shí)于樣本的實(shí)際情況,。

3,、用戶須一次性全額預(yù)付實(shí)驗(yàn)費(fèi)。

4,、由用戶提供的樣品或試劑所致的實(shí)驗(yàn)問題由用戶負(fù)責(zé),。

5、請(qǐng)?jiān)诒碇姓f明檢測具體要求,，由于填寫資料不詳所致任何問題由用戶負(fù)責(zé),。

6、請(qǐng)?jiān)谒蜆拥耐瑫r(shí)提供樣本來源及處理方法等信息,，樣品檢測后原則上本公司不負(fù)責(zé)保存,。

附：流式細(xì)胞術(shù)檢測樣品推薦制備方法

A. 直接標(biāo)記抗體（FITC標(biāo)記抗體）：

(1)收集1×106個(gè)細(xì)胞，800rpm離心5min,，4℃以上冷PBS洗一次,。

(2)用4%多.聚.甲.醛1ml室溫固定40分鐘，800rpm離心5min去上清,。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,，800rpm離 心5min。

(3)用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,，冰上孵育10min,，800rpm離心5min去上清。加入200ul含 0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清,。 加入200ul 1% 多.聚.甲.醛固定,，待測即可。

(4)用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10,000.00個(gè)細(xì)胞。

B. 未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法：

(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,，用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,，800rpm離心5min。

(2)用2ml 4%多.聚.甲.醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min,；2ml PBS重懸細(xì)胞,，800rpm離心5min；

(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,，冰上放置10min,800rpm離心5min,。 (4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體，冰上放置40min,800rpm離心5min,，用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,，800rpm離心 5min，洗去未結(jié)合一抗,，重復(fù)一次,。

(5)加入熒光標(biāo)記（FITC）標(biāo)記的二抗，冰上避光放置40min后,，800rpm離心5min，去上清,，PBS洗滌兩 次,。

(6)加入0.5ml 1%多.聚.甲.醛重懸細(xì)胞；固定待測,。

(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10,000.00個(gè)細(xì)胞,。

C.細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品（PI染色）的制備：

(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,，然后200g離心5分鐘,，棄上清。

(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,，4℃保存,，至少固定18小時(shí)。

(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,，取1毫升細(xì)胞懸液,，用PBS洗三次，細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,，37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析,。

(4)PI染液終濃度為50微克/毫升，RNase A終濃度為20微克/毫升,。

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果：

歡迎咨詢詳談,，我們會(huì)根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。

更多實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)請(qǐng)瀏覽網(wǎng)站其他內(nèi)容！

做實(shí)驗(yàn),，找星森林,！您的科研生涯，我們一路相伴,！

【平臺(tái)項(xiàng)目開展范圍】慢病毒,，腺病毒，RNAi類,，分子生物實(shí)驗(yàn),，病理實(shí)驗(yàn)，免疫學(xué)實(shí)驗(yàn),，細(xì)胞實(shí)驗(yàn),，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn),，芯片類實(shí)驗(yàn),，并為廣大客戶朋友們提供課題設(shè)計(jì)指導(dǎo)、基金申請(qǐng)指導(dǎo)等服務(wù),。

【星森林生物】已開展了數(shù)千個(gè)實(shí)驗(yàn)外包項(xiàng)目,。我們專注于醫(yī)學(xué)課題研究，已從課題申請(qǐng),、方案設(shè)計(jì),、試劑采購、模型構(gòu)造,、 標(biāo)本檢測,、數(shù)據(jù)分析，各個(gè)環(huán)節(jié)積累了數(shù)千個(gè)成功案例經(jīng)驗(yàn),，為數(shù)千個(gè)來自臨床的科研工作者解決了大量的科研問題,。更多相關(guān)實(shí)驗(yàn)服務(wù)信息請(qǐng)咨詢星森林生物。

流式細(xì)胞術(shù)