單細(xì)胞可視化分選系統(tǒng)——isoPick
- 公司名稱 QUANTUM量子科學(xué)儀器貿(mào)易（北京）有限公司
- 品牌 iotaSciences
- 型號
- 產(chǎn)地 英國
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2024/4/18 13:36:23
- 訪問次數(shù) 1816
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| 產(chǎn)地類別 | 進(jìn)口 |
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單細(xì)胞可視化分選系統(tǒng)——isoPick
單細(xì)胞可視化分選系統(tǒng)——isoPick是英國iotaSciences公司新推出的一款基于GRID技術(shù)、高通量,、高自動化的單細(xì)胞可視化分選系統(tǒng),。isoPick采用微射流技術(shù)，利用界面張力對細(xì)胞培養(yǎng)基（或干細(xì)胞涂層）進(jìn)行重塑,，在培養(yǎng)皿上雕刻出單獨(dú)的細(xì)胞腔室GRID,。isoPick可以在 6 厘米培養(yǎng)皿上創(chuàng)建 256 個單細(xì)胞腔室GRID陣列，并將細(xì)胞以納升體積全自動地分配到各個 GRID 單細(xì)胞腔室中,，通過isoPick的光學(xué)顯微鏡可以清楚地看到 GRID 室中的單細(xì)胞,。基于GRID技術(shù)和光學(xué)成像信息,，isoPick可以確保分選出的細(xì)胞100%為單細(xì)胞,。
設(shè)備特點(diǎn)
- 全自動化流程
- 操作簡單，對細(xì)胞無損傷
- 結(jié)果可追蹤
- 分離效率高達(dá)100%
- 直接轉(zhuǎn)移到PCR管或96孔板
- 結(jié)構(gòu)緊湊，體積小
傳統(tǒng)單細(xì)胞分離手段無法保證所得的樣品內(nèi)只有一個單細(xì)胞,，有可能有多個細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán),，導(dǎo)致下游的實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)誤差。單細(xì)胞可視化分選系統(tǒng)—isoPick采用的GRID技術(shù)結(jié)合圖像信息分析,，結(jié)果可追蹤,，保證100%準(zhǔn)確的單細(xì)胞分選。而且isoPick分選條件溫和,，可以顯著提高分選單細(xì)胞的存活率,。同時isoPick可將單細(xì)胞樣品按照特定的體積直接轉(zhuǎn)移到96孔板或PCR管中，無縫銜接單細(xì)胞下游應(yīng)用,，確保后續(xù)單細(xì)胞組學(xué)信息完整性,。
應(yīng)用領(lǐng)域
單細(xì)胞分選 | 單細(xì)胞克隆 | 單細(xì)胞組學(xué) | |
100%準(zhǔn)確的單細(xì)胞分選效率 | 顯著提升單細(xì)胞克隆的存活率（單克隆率） | 極大地簡化單細(xì)胞組學(xué)步驟 | |
技術(shù)優(yōu)勢 | 傳統(tǒng)單細(xì)胞分選方法無法保證所得的樣品中只有一個單細(xì)胞，而isoPick采用GRID單細(xì)胞腔室分離與光學(xué)信號驗(yàn)證相結(jié)合的分選技術(shù),，能夠保證分選所得的單細(xì)胞樣品中只有一個單細(xì)胞,。 | isoPick可以高效分離hiPSCs單細(xì)胞，用于構(gòu)建單克隆細(xì)胞系,。isoPick對敏感單細(xì)胞處理溫和,，能夠確保更高的單細(xì)胞存活率,，達(dá)到更佳的克隆生長效果,。 | isoPick可以將1.5~200 µl的單細(xì)胞樣品直接轉(zhuǎn)移至PCR管帶或96孔板中，無縫銜接后續(xù)單細(xì)胞測序scWGA流程,，極大地簡化單細(xì)胞組學(xué)步驟,。 |
單細(xì)胞分選前后的GRID細(xì)胞腔室 |
包被不同基質(zhì)的96孔板的單細(xì)胞hiPSC集落 |
單細(xì)胞的WGA結(jié)果 |
部分用戶單位
部分應(yīng)用案例
人類誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(hiPSCs)的單細(xì)胞克隆
人類誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(hiPSCs)構(gòu)建單克隆細(xì)胞系培養(yǎng)步驟繁瑣，細(xì)胞對異常的處理和操作非常敏感,，傳統(tǒng)單細(xì)胞分選容易導(dǎo)致細(xì)胞和遺傳毒性應(yīng)激的積累,，進(jìn)而導(dǎo)致不良分化和多能性喪失。
使用isoPick可以溫和,、自動地將人類誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(hiPSCs)進(jìn)行單細(xì)胞分選,，以高效率培養(yǎng)hiPSCs單克隆細(xì)胞系，顯著提高了細(xì)胞分離與克隆效率,。
K562細(xì)胞單細(xì)胞測序
傳統(tǒng)單細(xì)胞測序需對單細(xì)胞進(jìn)行全基因組擴(kuò)增（WGA）,，但傳統(tǒng)單細(xì)胞WGA受限于如何獲得單個細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到小體積的WGA反應(yīng)中。
使用isoPick自動將K562細(xì)胞拾取并轉(zhuǎn)移至含3.5 µl scWGA試劑的PCR管中,，并無縫銜接scWGA反應(yīng),。瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示（下圖），單細(xì)胞WGA的DNA樣本(+)中兩種基因均被特異性擴(kuò)增,，而陰性對照(-)沒有這兩種擴(kuò)增產(chǎn)物,，符合預(yù)期。
對人類誘導(dǎo)多能干細(xì)胞 (hiPSCs) Prime 編輯構(gòu)建工程細(xì)胞系
Prime 編輯可在 HEK3 基因座中高效精確插入三個核苷酸，用于構(gòu)建工程細(xì)胞系hiPSCs,。通過引入靶標(biāo)特異性 pegRNA 來編輯單個或多個基因組位點(diǎn),，以進(jìn)行精確有效的基因組編輯，促進(jìn)疾病建模和功能遺傳學(xué)研究,。
Prime 編輯使用與逆轉(zhuǎn)錄酶融合的 Cas9 切口酶,，將 DNA 序列從“Prime 編輯”引導(dǎo) RNA (pegRNA) 復(fù)制到特定基因座。通過Prime 編輯將多西環(huán)素誘導(dǎo)型 Prime Editor 蛋白 (PE2) 整合到 iPSC 細(xì)胞系的AAVS1 基因組,，之后使用isoPick分選轉(zhuǎn)入靶基因的hiPSCs細(xì)胞系,，以確保細(xì)胞的單克隆性。（見上圖）
該研究使用isoPick來確保工程細(xì)胞系的單克隆性與準(zhǔn)確性,。
參考文獻(xiàn)：Bharucha N, Ataam J A, Gavidia A A, et al. Generation of AAVS1 integrated doxycycline-inducible CRISPR-Prime Editor human induced pluripotent stem cell line[J]. Stem Cell Research, 2021, 57: 102610.
膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（GBM）通過表觀遺傳免疫編輯獲得骨髓相關(guān)轉(zhuǎn)錄程序以引發(fā)免疫逃逸
研究人員通過將多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞 (GSC) 連續(xù)移植到免疫活性宿主中,，發(fā)現(xiàn) GSC 通過建立增強(qiáng)的免疫抑制腫瘤微環(huán)境來免疫逃逸。從機(jī)制上講,，GSC通過表觀遺傳免疫編輯過程引起,，其在免疫攻擊后強(qiáng)制執(zhí)行 GSC 中穩(wěn)定的轉(zhuǎn)錄和表觀遺傳變化。研究中使用Irf8敲除細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)證明,，Irf8的激活是細(xì)胞免疫逃逸的一個重要因素,，且在體內(nèi)可能通過IFNγ介導(dǎo)的激活發(fā)生。該研究使用isoPick構(gòu)建Irf8克隆敲除系,。
參考文獻(xiàn)：Gangoso E, Southgate B, Bradley L, et al. Glioblastomas acquire myeloid-affiliated transcriptional programs via epigenetic immunoediting to elicit immune evasion[J]. Cell,。
此產(chǎn)品不用于醫(yī)療及臨床，僅用于科研或動物實(shí)驗(yàn)
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