特性：

安全性：所有腫瘤和病毒轉染的細胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內操作,，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄,。收到細胞后,，在倒置鏡下*好是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

（一）如果細胞未長滿,，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內,，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶,，吸出培養(yǎng)液,，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。(二)如果細胞已長滿,，即可進行傳代培養(yǎng),。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次,。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，倒放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預熱，之后翻轉培養(yǎng)瓶10-30秒后,，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化,。

3. 按6-8ml/瓶補加*培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半,，分到新的培養(yǎng)瓶中,。如果沒有特別說明，收到細胞后的*次傳代一般是一傳二,。

注意事項：

1,、觀察細胞在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否則不能準確判斷細胞的傳代密度,?？醇毎男螒B(tài)請在10X或20X物鏡下。

2,、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基,，細胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3,、有些細胞貼壁不牢,，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內,。

4,、收到細胞后,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,，請及時與我們,。