SM-021262M-D01 1 請(qǐng)于-20℃條件下保存，有效期 15 個(gè)月 物種鑒定系列 鴨源性成分核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)?GB 標(biāo)準(zhǔn)） ◆ 產(chǎn)品說(shuō)明 物種鑒定系列可針對(duì)食品,、飼料等樣品中動(dòng)物源性成分的特異核酸片段進(jìn)行擴(kuò)增,，通過(guò)實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線 判定結(jié)果。本產(chǎn)品用于鴨源性成分的檢測(cè),，檢出限為 0.1%,。 ◆ 產(chǎn)品組成（48 測(cè)試） ◆ 適用儀器 021262M 試劑 含量 A-鴨源-P 20μL × 8 管× 6 排 NG-P 100μL × 2 支 PG-鴨源-P 100μL × 1 支 ABI 7500,、CFX 96,、Mx 3005P、LineGene9600 等實(shí)時(shí)熒光 PCR 儀,。 ◆ 自備耗材和儀器 ①冰盒,；②移液器（0.5-10μL，10-100μL,，100-1000μL）及配套滅菌吸頭,；③離心機(jī)；④渦旋混勻器,；⑤金屬浴,。 ◆ 注意事項(xiàng) 1. 本試劑檢測(cè)靈敏度高,。為了防止污染，實(shí)驗(yàn)要分區(qū)操作,。 1） 一區(qū)：樣本制備區(qū),。 2） 二區(qū)：模板添加區(qū)。 3） 三區(qū)：擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū),。 ★ 分區(qū)之間進(jìn)行物理性隔離,，避免人為因素造成的污染。 2. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中穿戴工作服和乳膠手套,，不同區(qū)域獨(dú)立使用工具,，需更換手套和實(shí)驗(yàn)服。 3. 嚴(yán)格按照操作步驟操作,，試劑配制和加樣等步驟請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求在冰盒上操作,。 4. 反應(yīng)液中的成分對(duì)光敏感，應(yīng)避光保存,。試劑使用前要解凍,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，推薦使用前離心 30 秒,。 5. 反應(yīng)結(jié)束后,，擴(kuò)增管請(qǐng)置于密封袋內(nèi)丟棄，當(dāng)日清理,，開(kāi)蓋易造成氣溶膠污染,，禁止開(kāi)蓋。 6. 不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿混合使用,，在有效期內(nèi)使用,。 ◆樣品處理 參照《GB/T 38164-2019 常見(jiàn)畜禽動(dòng)物源性成分檢測(cè)方法 實(shí)時(shí)熒光 PCR 法》或其他標(biāo)準(zhǔn)處理樣品，制備的樣 本保存待用,。 樣品的采集和制備是動(dòng)物源性鑒別的重要步驟,，為防止交叉污染，應(yīng)使用一次性消耗品,，研缽應(yīng)經(jīng) 160℃干烤 2 h,，其他不宜干烤或高壓處理的器皿應(yīng)使用 1%次氯酸鈉溶液浸泡。 取樣應(yīng)盡量采取肌肉組織,，對(duì)于同一批樣品,，應(yīng)多點(diǎn)采集合并后，作為一份樣品進(jìn)行均質(zhì),，提取樣本,。 采樣過(guò)程應(yīng)快速完成，將采取的樣品迅速放入組織攪碎機(jī)中進(jìn)行均質(zhì)成糜狀，充分混勻,，取 0.1 g 充分混勻的 樣品,，采用液氮研磨或均質(zhì)器均質(zhì)。 詳細(xì)步驟請(qǐng)按照標(biāo)準(zhǔn)操作,。 ◆ 實(shí)驗(yàn)操作 1.模板制備（樣本制備區(qū)）SM-021262M-D01 2 陽(yáng)性對(duì)照 空白對(duì)照 建議使用動(dòng)物組織提取試劑盒等商品化試劑盒,，具體過(guò)程詳見(jiàn)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 2.添加模板（模板添加區(qū),，放置于冰盒上進(jìn)行） 剪下所需測(cè)試數(shù)的已含有反應(yīng)液的 PCR 管,，放置在室溫待解凍后，離心 30 秒后揭開(kāi)封口膜,，向每管反應(yīng)液中 分別加入 5μL 模板,，順序?yàn)?NG、待測(cè)樣品模板,、PG-鴨源-P,。蓋好配套的 PCR 管蓋后，渦旋混勻 30s,，離心 1min,， 立即進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)。 3.擴(kuò)增反應(yīng)（擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)） 使用熒光定量 PCR 儀,，熒光基團(tuán)選擇 FAM,，淬滅基團(tuán)選擇 NONE。 按下列條件設(shè)置擴(kuò)增反應(yīng)： PCR 循環(huán) 熒光收集位點(diǎn) 去污染 37℃ 10 分鐘 1 個(gè)循環(huán) — 預(yù)變性 95℃ 5 分鐘 1 個(gè)循環(huán) — 擴(kuò)增 95℃ 15 秒 40 個(gè)循環(huán) — 60℃ 60 秒 ※ 4.基線和閾值設(shè)定 基線調(diào)整取 3-15 個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào),，閾值線應(yīng)超過(guò)空白對(duì)照擴(kuò)增曲線的高點(diǎn),。 ◆結(jié)果判定 檢測(cè)樣品 Ct≥40，曲線為直線或輕微斜線,，無(wú)“S”型擴(kuò)增曲線,，可報(bào)告樣品陰性，不含有鴨源性成分或含量低 于檢測(cè)限,； 檢測(cè)樣品 Ct≤35,，曲線呈“S”型擴(kuò)增曲線，可直接報(bào)告樣品陽(yáng)性,，含有鴨源性成分,； 檢測(cè)樣品 35＜Ct＜40，需進(jìn)行一次重復(fù)實(shí)驗(yàn),，若 Ct 值≥40 則為陰性,，不含有鴨源性成分或含量低于檢測(cè)限； 否則為陽(yáng)性,，含有鴨源性成分。 ★ NG 反應(yīng)為平滑直線，PG 反應(yīng)為“S”型擴(kuò)增曲線,，此次檢測(cè)結(jié)果有效,，否則無(wú)效。如重復(fù)檢測(cè)結(jié)果仍為無(wú)效,，請(qǐng)與技術(shù)支持 人員聯(lián)系,。