花生源性成分核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?nbsp;

◆ 產(chǎn)品說(shuō)明 物種鑒定系列中的過(guò)敏原鑒定試劑,，可針對(duì)食品中過(guò)敏原成分的特異核酸片段進(jìn)行擴(kuò)增,，通過(guò)實(shí) 時(shí)擴(kuò)增曲線(xiàn)判定結(jié)果。本產(chǎn)品用于糕點(diǎn),、糖果,、冰淇淋等食品中過(guò)敏原花生成分的檢測(cè)，檢出限為 0.01%,。 

◆ 產(chǎn)品組成（48 測(cè)試） 

◆ 適用儀器 ABI 7500,、CFX 96、Mx 3005P,、LineGene9600 等實(shí)時(shí)熒光 PCR 儀,。

◆ 自備耗材和儀器 ①冰盒；②移液器（0.5-10μL,，10-100μL,，100-1000μL）及配套滅菌吸頭；③離心機(jī),；④渦旋混勻器,；⑤金屬 浴。

◆ 注意事項(xiàng) 1. 本試劑檢測(cè)靈敏度高,。為了防止污染,，實(shí)驗(yàn)要分區(qū)操作。 1） 一區(qū)：樣本制備區(qū),。 2） 二區(qū)：模板添加區(qū),。 3） 三區(qū)：擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)。 ★ 分區(qū)之間進(jìn)行物理性隔離，避免人為因素造成的污染,。 2. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中穿戴工作服和乳膠手套,，不同區(qū)域獨(dú)立使用工具，需更換手套和實(shí)驗(yàn)服,。 3. 嚴(yán)格按照操作步驟操作,，試劑配制和加樣等步驟請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求在冰盒上操作。 4. 反應(yīng)液中的成分對(duì)光敏感,，應(yīng)避光保存,。試劑使用前要解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,，推薦使用前離心 30秒,。 5. 反應(yīng)結(jié)束后，擴(kuò)增管請(qǐng)置于密封袋內(nèi)丟棄,，當(dāng)日清理,，開(kāi)蓋易造成氣溶膠污染，禁止開(kāi)蓋,。 6. 不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿混合使用,，在有效期內(nèi)使用。 

◆樣品處理 參照《SN/T 1961.2-2007 食品中過(guò)敏原成分檢測(cè)方法 第 2 部分：實(shí)時(shí)熒光 PCR 方法檢測(cè)花生成分》或其 他標(biāo)準(zhǔn)處理樣品,，制備的樣本保存待用。 稱(chēng)取約 200g 樣品,，用潔凈研缽或合適的粉碎裝置將樣品粉碎至粉末狀用以提取,。 樣品的采集和制備是過(guò)敏原成分鑒別的重要步驟，為防止交叉污染,，應(yīng)使用一次性消耗品,，研缽應(yīng)經(jīng) 160℃干烤 2 h，其他不宜干烤或高壓處理的器皿應(yīng)使用 1%次氯酸鈉溶液浸泡,。其它防止交叉污染的措施按照 GB/T 27403 中的規(guī)定執(zhí)行,。 詳細(xì)步驟請(qǐng)按照標(biāo)準(zhǔn)操作。 

◆ 實(shí)驗(yàn)操作 1.模板制備（樣本制備區(qū)） 建議使用植物基因組提取試劑盒或深加工食品成分提取試劑盒等商品化試劑盒,，具體過(guò)程詳見(jiàn)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū),。 2.添加模板（模板添加區(qū)，放置于冰盒上進(jìn)行） 剪下所需測(cè)試數(shù)的已含有反應(yīng)液的 PCR 管,，放置在室溫待解凍后,，離心 30 秒后揭開(kāi)封口膜，向每管反應(yīng)液 中分別加入 5μL 模板,，順序?yàn)?NG,、待測(cè)樣品模板、PG-花生源-P。蓋好配套的 PCR 管蓋后,，渦旋混勻 30s,，離心 022022M 試劑 含量 A-花生源-P 20μL × 8 管× 6 排 NG-P 100μL × 2支 PG-花生源-P 100μL × 1支SM-022022M-D02 2 陽(yáng)性對(duì)照 陰性對(duì)照 1min， 立即進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增反應(yīng),。 3.擴(kuò)增反應(yīng)（擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)） 使用熒光定量 PCR 儀,，熒光基團(tuán)選擇 FAM，淬滅基團(tuán)選擇NONE,。 按下列條件設(shè)置擴(kuò)增反應(yīng)： PCR 循環(huán) 熒光收集位點(diǎn) 去污染 37℃ 10 分鐘 1 個(gè)循環(huán) — 預(yù)變性 95℃ 5 分鐘 1 個(gè)循環(huán) — 擴(kuò)增 95℃ 15 秒 45個(gè)循環(huán) — 60℃ 60 秒 ※ 4.基線(xiàn)和閾值設(shè)定 基線(xiàn)范圍選擇一般在 6-15 個(gè)循環(huán),，如果有強(qiáng)陽(yáng)性樣本，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整基線(xiàn)范圍,。閾值線(xiàn)應(yīng)超過(guò)空白對(duì) 照擴(kuò)增曲線(xiàn)的高點(diǎn),，且Ct 值不出現(xiàn)任何數(shù)值。 

◆ 結(jié)果判定 陽(yáng)性對(duì)照正常結(jié)果：出現(xiàn)明顯熒光增幅,，Ct 值≤30,。 空白對(duì)照正常結(jié)果：無(wú)明顯的熒光增幅。 檢測(cè)樣品無(wú)熒光增幅現(xiàn)象,，并且陽(yáng)性對(duì)照,、空白對(duì)照結(jié)果正常者，可判定該樣品中未檢出過(guò)敏原花生成分,。 檢測(cè)樣品 Ct 值≤40,，曲線(xiàn)有明顯的熒光增幅現(xiàn)象，并且陽(yáng)性對(duì)照,、空白對(duì)照結(jié)果正常者,，可判定該樣品 中檢 出過(guò)敏原花生成分。 檢測(cè)樣品 Ct 值在 40~45 之間,，應(yīng)重做實(shí)時(shí)熒光 PCR 反應(yīng),。再次擴(kuò)增后的結(jié)果 Ct 值仍在 40~45 之間，并且 陽(yáng)性對(duì)照,、空白對(duì)照結(jié)果正常者,，可判定該樣品中檢出過(guò)敏原花生成分，否則判定該樣品中未檢出過(guò)敏原花生成分,。 ★ NG 反應(yīng)為平滑直線(xiàn),，PG 反應(yīng)為“S”型擴(kuò)增曲線(xiàn)，此次檢測(cè)結(jié)果有效,，否則無(wú)效,。如重復(fù)檢測(cè)結(jié)果仍為無(wú)效，請(qǐng)與技術(shù) 支持人員聯(lián)系,。