大豆內(nèi)源檢測試劑盒（PCR-熒光探針法） 

◆ 產(chǎn)品說明 轉(zhuǎn)基因檢測系列產(chǎn)品可針對食品,、飼料等樣品中轉(zhuǎn)基因成分的特異核酸片段進行擴增,，通過實時擴 增曲線判定結(jié)果。本產(chǎn)品參照《GB/T 19495.4-2018 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測 實時熒光定性聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）檢測方 法》和《SN/T 1204-2016 植物及其加工產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分實時熒光 PCR 定性檢驗方法》等標準開發(fā),，用于大豆內(nèi) 源基因成分的檢測,，檢出限為 0.01%。

◆ 產(chǎn)品組成（48 測試） 043012M 試劑 含量 A-Lectin-P 20 μL × 8 管× 6 排 NG-P 100 μL × 2 支 PG-Lectin-P 100 μL × 1 支

◆ 適用儀器 ABI 7500,、CFX 96,、Mx 3005P、LineGene9600 等實時熒光 PCR 儀,。 

◆ 自備耗材和儀器 ①冰盒,；②移液器（0.5-10 μL，10-100 μL,，100-1000 μL）及配套滅菌吸頭；③離心機,；④渦旋混勻器,；⑤金 屬浴,；⑥均質(zhì)機,、攪拌機或研缽等研磨器具；⑦電子天平,。 

◆ 注意事項 1．本試劑檢測靈敏度高,。為了防止污染，實驗要分區(qū)操作,。 1）一區(qū)：樣本制備區(qū),。 2）第二區(qū)：模板添加區(qū),。 3）第三區(qū)：擴增及產(chǎn)物分析區(qū)。 ★ 分區(qū)之間好進行物理性隔離,，避免人為因素造成的污染,。 2．實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套，不同區(qū)域獨立使用工具,，需更換手套和實驗服,。 3．嚴格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰盒上操作,。 4．反應(yīng)液中的成分對光敏感,，應(yīng)避光保存。試劑使用前要解凍,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,，推薦使用前離心 30 秒。 5．反應(yīng)結(jié)束后,，擴增管請置于密封袋內(nèi)丟棄,，當日清理，開蓋易造成氣溶膠污染,，禁止開蓋,。 6．不同批號試劑請勿混合使用，在有效期內(nèi)使用,。 

◆ 樣品處理 參照《GB/T 19495.3-2004 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測 核酸提取純化方法》或其他標準處理樣品,，除了處于食物和（或） 飼料鏈起始端的農(nóng)產(chǎn)品和粗加工材料（如粉碎的產(chǎn)品），大多數(shù)工業(yè)加工的食品經(jīng)過了物理,、化學(xué)及酶的處理,。這 些處理會降低的含量及純度。因此,，每一方法的適用性及重復(fù)性會隨特異樣品而異,，一種特定的  提取方 法的性質(zhì)特征依賴于被研究的食品種類。實驗室樣品的代表性應(yīng)符合《GB/T 19495.7-2004 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測 抽樣和 制樣方法》,。制備的樣本保存待用,。 ★ 若使用非一次性研磨器研磨樣品，一定要清洗研磨器并充分干燥后再進行下一份樣品的研磨,，防止交叉污染,。 

◆ 實驗操作 1．模板制備（樣本制備區(qū)） 建議使用配套植物基因組提取試劑盒，具體過程詳見產(chǎn)品說明書,。SM-043012M-D01 2 2．添加模板（模板添加區(qū),，放置于冰盒上進行） 剪下所需測試數(shù)的已含有反應(yīng)液的 PCR 管，放置在室溫待解凍后，離心 30 秒后揭開封口膜,，向每管反應(yīng)液 中分別加入 5 μL 模板,，順序為 NG、待測樣品模板,、PG-Lectin-P,。蓋好配套的 PCR 管蓋后，渦旋混勻,，離心 30 秒,， 立即進行 PCR 擴增反應(yīng)。 3．擴增反應(yīng)（擴增及產(chǎn)物分析區(qū)） 使用熒光定量 PCR 儀,，熒光基團選擇 FAM,，淬滅基團選擇 NONE。 按下列條件設(shè)置擴增反應(yīng)： PCR 循環(huán) 熒光收集位點 去污染 37℃ 10 分鐘 1 個循環(huán) — 預(yù)變性 95℃ 5 分鐘 1 個循環(huán) — 擴增 95℃ 15 秒 40 個循環(huán) — 60℃ 1 分鐘 ※ 4．基線和閾值設(shè)定 基線調(diào)整取 3-15 個循環(huán)的熒光信號,，閾值線應(yīng)超過空白對照擴增曲線的高點,。

◆ 結(jié)果判定 測試樣品檢測 Ct 值≥40，曲線為直線或輕微斜線,，無“S”型擴增曲線,，可判定樣品不含有大豆內(nèi)源基因或含量 低于檢出限,； 測試樣品檢測 Ct 值≤36,，曲線呈“S”型擴增曲線,，可判定樣品含有大豆內(nèi)源基因,； 測試樣品檢測 Ct 值在 36～40 之間，應(yīng)調(diào)整模板濃度,，重做實時熒光 PCR,。再次擴增后的樣品檢測 Ct 值＜40,， 則可判定樣品含有大豆內(nèi)源基因,；再次擴增后的樣品檢測 Ct 值≥40,，則可判定該樣品不含有大豆內(nèi)源基因或含量 低于檢出限。 ★NG 反應(yīng)為平滑直線,，PG 反應(yīng)為“S”型擴增曲線,，此次檢測結(jié)果有效，否則無效,。如重復(fù)檢測結(jié)果仍為無效,，請與技術(shù)支持人 員聯(lián)系。 參考結(jié)果圖