ADPG焦磷酸化酶(AGP)測試盒微量法

本公司所有產(chǎn)品僅供科學(xué)實驗,，不做其他科學(xué)實驗外的使用,！
商品屬性：

測定意義：

AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸與 ATP 反應(yīng)生成淀粉合成的直接 前體 ADPG,，是植物淀粉生物合成的主要限速步驟,。

測定原理

AGP 催化的逆向反應(yīng)生成 G1P，在反應(yīng)體系中添加的磷酸己糖變位酶和 6-磷酸葡萄糖脫氫 酶依次催化生成 6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH,，340nm 下測定 NADPH 增加速率,，即可計算 AGP 活性。

需自備的的儀器和用品

紫外分光光度計/酶標儀,、水浴鍋,、臺式離心機、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96 孔板,、 研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制

提取液：液體 100mL×1 瓶,，4℃保存;

試劑一：液體 20mL×1 瓶,，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶,，4℃保存,；臨用前加入 9mL 蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑分裝 后-20℃保存,，禁止反復(fù)凍融,；

試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃保存,；臨用前加入 4mL 蒸餾水充分溶解備用,；用不完的試劑分裝 后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融,；

粗酶液制備 按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min,，取上清,，置冰上待測。

訂購流程:

1,、訂購前,請與銷售員核對產(chǎn)品中文名稱/CAS號/英文名稱等,。

2、我司大部分產(chǎn)品都是現(xiàn)貨,產(chǎn)品核實好下單后即可當天發(fā)貨,。(庫存信息以當日為準)如有特殊要求請在發(fā)貨前與銷售員聯(lián)系,。

3、我司產(chǎn)品支持款到發(fā)貨,、快遞代收尾款,、網(wǎng)上現(xiàn)拍等付款方式。

4,、質(zhì)量保證,嚴格把關(guān),如有產(chǎn)品異議經(jīng)公司鑒定確認后可包換包退,免除客戶后顧之憂,。

5、我司提供完善的售后服務(wù),使用過程中如有任何疑問,可提供技術(shù)指導(dǎo),。

測定步驟:

1,、分光光度計或酶標儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2、試劑一置 30℃保溫 10min 以上,。

3,、在 EP 管中按順序加入下列試劑

試劑名稱（μL） 測定管

試劑一 50

試劑二 80

樣本 10

混勻，30℃保溫 15 min,，置沸水浴中 1 min（蓋緊,，防止水分散失），冰浴迅速冷卻后,，4000g4℃

離心 5min,，取上清液，在 96 孔板中依次加入下列試劑

上清液 80

試劑一 85

試劑三 35

混勻后,，立即于 340 nm 波長下記錄初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2,，計算ΔA=A2-A1。

AGP 活性計算

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下：

1,、按樣本蛋白蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 定義為一個酶活性單位,。

AGP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷(V 樣×Cpr) ÷T×稀釋倍數(shù)=2813×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。

2,、按照樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 定義為一個酶活力單位,。

AGP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T×稀釋倍數(shù)=2813×ΔA÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積,，2×10-4

L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù),，6.22×103L / mol /cm,；d：

比色皿光徑，1cm,；V 樣：加入樣本體積，0.01mL,；V 樣總：加入提取液體積,，1 mL；T：

反應(yīng)時間,，2 min,；稀釋倍數(shù)：1.75；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量。

b.使用 96 孔板測定的計算公式如下：

1,、按樣本蛋白蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 定義為一個酶活性單位,。

AGP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷(V 樣×Cpr) ÷T×稀釋倍數(shù)=5627×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。

2,、按照樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 定義為一個酶活力單位,。

AGP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109

]÷（W ×V 樣÷V 樣總）÷T×稀釋倍數(shù)=5627×ΔA÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4

L,；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù),，6.22×103L / mol /cm；d：

96 孔板光徑,，0.5cm,；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL,；V 樣總：加入提取液體積,，1 mL；T：

反應(yīng)時間,，2 min,；稀釋倍數(shù)：1.75；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量。

生化試劑盒的使用注意事項：

選擇合適的試劑盒：根據(jù)實驗?zāi)康暮蜋z測對象選擇合適的試劑盒,，確保實驗的準確性和可靠性,。

嚴格遵循說明書：按照試劑盒的說明書進行操作,，避免誤用或浪費。

注意保存條件：按照試劑盒的保存條件進行妥善保存,，避免陽光直射,、高溫或潮濕等不利因素。

控制實驗條件：在實驗過程中嚴格控制實驗條件,，如溫度,、時間、pH值等,，以確保實驗結(jié)果的穩(wěn)定性,。

公司正在出售的產(chǎn)品：