Ca++Mg++ ——ATP酶測試盒微量法

本公司所有產(chǎn)品僅供科學(xué)實(shí)驗(yàn),，不做其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)外的使用,！
商品屬性：

測定意義：

Ca++ Mg++-ATP 酶廣泛分布于植物、動物,、微生物和細(xì)胞中,，可催化 ATP 水解生成 ADP 和無機(jī)磷。

測定原理：

根據(jù) Ca++ Mg++-ATP 酶分解 ATP 生成 ADP 及無機(jī)磷,，通過測定無機(jī)磷的量來確定 ATP 酶活性高低,。

需自備的儀器及用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋,、臺式離心機(jī),、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板,、研缽,、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL ×1 瓶,，4℃保存,。

試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存,。

試劑二：粉劑×1 瓶,，-20℃保存；臨用前加入 6mL 蒸餾水充分混勻待用,；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復(fù)凍融。

試劑三：液體 2mL×1 瓶,，4℃保存,。

試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存,。用時(shí)加入 3mL 蒸餾水,， 4℃保存。

試劑五：粉劑×1 瓶, 4℃保存,。用時(shí)加入 25mL 蒸餾水,，溶解后 4℃保存一周。

試劑六：粉劑×1 瓶, 4℃保存,。用時(shí)加入 25mL 蒸餾水,，溶解后 4℃保存一周。

試劑七：液體 25mL×1 瓶,，室溫保存,。

試劑八：10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 10mL×1 瓶,，4℃保存。

0.5μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制：將試劑八 20 倍稀釋,，即取 0.1mL 試劑八加 1.9mL 蒸餾水充分混勻,。

定磷劑的配制：按 H2O: 試劑五:試劑六:試劑七=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色,。若無色則試劑失效,，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配,。

注意：配試劑最好用新的燒杯,、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿,，避免磷污染,。

樣品酶液的制備：

1、細(xì)菌,、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液）,，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴,，功率 20％或 200W，超聲 3s,，間隔 10s,，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min,，取上清,，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，

加入 1mL 提取液）,，進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,，取上清,，置冰上待測。

2,、血清（漿）樣品：直接檢測,。

訂購流程:

1,、訂購前,請與銷售員核對產(chǎn)品中文名稱/CAS號/英文名稱等,。

2、我司大部分產(chǎn)品都是現(xiàn)貨,產(chǎn)品核實(shí)好下單后即可當(dāng)天發(fā)貨,。(庫存信息以當(dāng)日為準(zhǔn))如有特殊要求請?jiān)诎l(fā)貨前與銷售員聯(lián)系,。

3,、我司產(chǎn)品支持款到發(fā)貨、快遞代收尾款,、網(wǎng)上現(xiàn)拍等付款方式,。

4、質(zhì)量保證,嚴(yán)格把關(guān),如有產(chǎn)品異議經(jīng)公司鑒定確認(rèn)后可包換包退,免除客戶后顧之憂,。

5,、我司提供完善的售后服務(wù),使用過程中如有任何疑問,可提供技術(shù)指導(dǎo)。

測定步驟:

1,、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長至 660nm，蒸餾水調(diào)零,。

2,、酶促反應(yīng)（在 EP 管中加入下列試劑）

對照管 測定管

試劑一（μL） 65 45

試劑二（μL） 60 60

試劑三（μL） 20

樣本 （μL） 100

混勻，37℃（哺乳動物）或 25℃（其他物種）準(zhǔn)確水浴 10min

試劑四（μL） 25 25

樣本 （μL） 100混勻,，8000g,，25℃離心 10min，取上清液

3,、定磷（在 EP 管或 96 孔板中加入下列試劑）空白管 標(biāo)準(zhǔn)管 對照管 測定管0.5μmol/ml 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液（μL） 20

上清液（μL） 20 20

蒸餾水（μL） 20

定磷試劑（μL） 200 200 200 200

混勻,，室溫放置 30min，在 660nm 處,，記錄各管吸光值,。

注意事項(xiàng)：

1、由于每一個樣都必須做對照,，本試劑盒 100 管只能測 48 份 Ca++ Mg++-ATP 酶,。

2、此法具有微量,、靈敏,、快速的特點(diǎn)。所以對測定所用試管要求嚴(yán)格無磷,。避免磷污染是檢測成敗的關(guān)鍵,。

3、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要做一管,。

Ca++ Mg++- ATPase 活力的計(jì)算：

1,、血清（漿）Ca++ Mg++- ATPase 活力的計(jì)算:

定義：每小時(shí)每毫升血清（漿）中 Ca++ Mg++- ATP 酶分解 ATP 產(chǎn)生 1μmol 無機(jī)磷的量為一個酶活力單位。

Ca++ Mg++-ATP 酶活力（μmol/h/mL）= [C 標(biāo)準(zhǔn)管×V 總]×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷V 樣÷T=7.5×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）

2,、組織,、細(xì)菌或細(xì)胞中 Ca++ Mg++- ATPase 活力的計(jì)算：

（1）按蛋白濃度計(jì)算：

定義：每小時(shí)每毫克組織蛋白中 Ca++ Mg++- ATP 酶分解 ATP 產(chǎn)生 1μmol 無機(jī)磷的量為一個酶活力單位。

Ca++ Mg++-ATP 酶活力(μmol/h / mg prot)= [C 標(biāo)準(zhǔn)管×V 總]×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷（V 樣×Cpr）÷T =7.5×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

定義：每小時(shí)每克組織中 Ca++ Mg++

-ATP 酶分解 ATP 產(chǎn)生 1μmol 無機(jī)磷的量為一個酶活力單位。

Ca++ Mg++-ATP 酶活力(μmol/h /g 鮮重)=[C 標(biāo)準(zhǔn)管×V 總]×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=7.5×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

定義：每小時(shí)每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞中 Ca++ Mg++-ATP 酶分解 ATP 產(chǎn)生 1μmol 無機(jī)磷的量為

一個酶活力單位,。

Ca++ Mg++-ATP 酶活力(μmol/h /104cell)= [C 標(biāo)準(zhǔn)管×V 總]×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)

管-A 空白管）÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.015×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）

C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度,，0.5μmol/mL；V 總：酶促反應(yīng)總體積,，0.25mL,；V 樣：加入樣本體

積，0.1mL ,；V 樣總：加入提取液體積,，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間,，1/6 小時(shí),；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；W：樣本鮮重,，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),，500 萬,。

生化試劑盒的使用注意事項(xiàng)：

選擇合適的試劑盒：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜋z測對象選擇合適的試劑盒，確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性,。

嚴(yán)格遵循說明書：按照試劑盒的說明書進(jìn)行操作,，避免誤用或浪費(fèi)。

注意保存條件：按照試劑盒的保存條件進(jìn)行妥善保存,，避免陽光直射,、高溫或潮濕等不利因素。

控制實(shí)驗(yàn)條件：在實(shí)驗(yàn)過程中嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件,，如溫度,、時(shí)間、pH值等,，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性,。

公司正在出售的產(chǎn)品：