20561ES03 His標簽蛋白純化磁珠
- 公司名稱 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型號 20561ES03
- 產(chǎn)地 上海
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/2/7 13:36:33
- 訪問次數(shù) 526
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企業(yè)簡介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白質(zhì)改造和酶進化技術為驅(qū)動,，聚焦生命科學產(chǎn)業(yè)鏈上游核心原料，從事分子,、蛋白和細胞三大品類生物試劑的研發(fā),、生產(chǎn)與銷售的高新技術企業(yè)，通過打通分子酶,、蛋白,、抗體、核酸,、細胞的技術開發(fā)路徑，成為國內(nèi)少數(shù)同時覆蓋三大品類生物試劑,、兼?zhèn)浜诵募夹g自主研發(fā)能力和規(guī)?；a(chǎn)能力的高新技術企業(yè)，產(chǎn)品廣泛應用于生命科學研究領域,、診斷與檢測領域和生物醫(yī)藥領域,。
主營業(yè)務
公司憑借在蛋白質(zhì)改造和酶進化領域的技術優(yōu)勢和深耕生物試劑行業(yè)多年積累的豐富經(jīng)驗，構(gòu)建了品質(zhì)優(yōu)良,、類型齊全,、種類豐富的產(chǎn)品管線。自公司成立以來,，公司研發(fā),、生產(chǎn)和銷售的生物試劑超過3000種，涵蓋分子,、蛋白,、細胞三大品類的生物試劑，能夠滿足客戶多種類型生物試劑的一體化采購需求,。公司核心產(chǎn)品覆蓋qPCR系列,、NGS系列,、逆轉(zhuǎn)錄系列、核酸提取與純化系列,、PCR系列,、分子克隆系列、體外轉(zhuǎn)錄系列,、抗體,、蛋白純化系列、蛋白分析系列,、重組蛋白、細胞分析系列,、細胞培養(yǎng)系列,、細胞轉(zhuǎn)染系列、報告基因檢測系列等多個品類的生物試劑,，廣泛應用于生命科學研究,、診斷檢測和生物醫(yī)藥等領域。
發(fā)展歷程
榮譽資質(zhì)
翌圣生物通過申請商標和軟件著作權的方式保障核心技術和市場競爭力,，不斷加強公司品牌建設,。截至2022年3月31日，公司已經(jīng)獲得授權18項（其中發(fā)明14項,、實用新型1項,、外觀設計3項）和45項與生物試劑相關的軟件著作權，擁有經(jīng)國家知識產(chǎn)權局商標局核準的注冊商標權37項以及4項境外注冊商標,，是國家高新技術企業(yè)和上海市專精特新企業(yè),。
創(chuàng)新平臺
經(jīng)過多年的產(chǎn)品研發(fā)技術經(jīng)驗的沉淀以及持續(xù)的研發(fā)創(chuàng)新，翌圣生物積極開展“產(chǎn)學研”合作,，與擁有生物催化與酶領域國家重點實驗室的湖北大學,、擁有教育部工業(yè)生物領域重點研究基地的江南大學展開合作，優(yōu)化生物試劑關鍵原料的生產(chǎn)和表達工藝,。翌圣生物以基因工程技術,、生物信息技術、細胞生物學技術,、免疫學技術,、生化分析技術等生命科學領域的共性生物技術為基礎，建立了六大核心技術平臺——雙向分子酶理性設計與定向進化平臺,、密度發(fā)酵與超潔凈純化平臺,、分子診斷試劑關鍵原料研發(fā)平臺、高通量測序建庫試劑創(chuàng)新研發(fā)平臺,、高性能單克隆抗體研發(fā)平臺和mRNA醫(yī)藥應用研發(fā)平臺,，目前已經(jīng)自主研發(fā)出20項核心技術,，打通分子酶、蛋白,、抗體,、核酸、細胞的技術開發(fā)路徑,，覆蓋技術研發(fā),、產(chǎn)品升級、規(guī)模生產(chǎn)和質(zhì)量控制等生物試劑研發(fā)和生產(chǎn)的各關鍵環(huán)節(jié),。
工業(yè)化生產(chǎn)
翌圣生物擁有按照準GMP 標準建設運營的工業(yè)化生產(chǎn)基地,，配有噸級發(fā)酵線、工業(yè)級 AKTA 純化線和全自動包裝線,。同時,，公司通過了ISO 13485:2016質(zhì)量管理體系認證，從原料控制,、生產(chǎn)管理,、質(zhì)檢管控、倉儲運輸?shù)葘ιa(chǎn)線進行360度管理監(jiān)督,，保證產(chǎn)品過程的可控制性及可追溯性,，竭盡全力為您提供可靠的產(chǎn)品。
客戶服務
翌圣生物憑借優(yōu)質(zhì)穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量,、高效及時的響應能力,、快速穩(wěn)定的交付能力和周到完備的售后服務獲得了眾多科研用戶和工業(yè)用戶的認可，為檢測公司,、治療公司,、工具類公司和科學研究實驗室提供應用于科學研究、體外診斷,、基因測序、生物醫(yī)藥等的生物試劑,。與中國科學院,、清華大學、北京大學,、復旦大學,、上海交通大學、浙江大學等頂尖科研院所和華大基因,、恒瑞醫(yī)藥,、藥明康德、之江生物,、圣湘生物,、斯微生物,、金斯瑞、思路迪等工業(yè)客戶建立了穩(wěn)定,、緊密的合作關系,，公司產(chǎn)品被多次使用在Nature、Science,、Cell等國際頂級期刊論文發(fā)表中,。
公司企業(yè)文化
幫助客戶創(chuàng)造價值，讓世界更健康更快樂
◎ 成為生命科學工具領域全球Top⑩
◎ 具備驅(qū)動產(chǎn)業(yè)變革的技術創(chuàng)新能力
◎ 擁有一支持續(xù)學習型的翌圣鐵軍
翌圣生物始終秉承“幫助客戶創(chuàng)造價值,，讓世界更健康更快樂”的使命,，專注于技術創(chuàng)新和產(chǎn)品升級，不斷拓展核心技術的應用領域,，為客戶提供更為的產(chǎn)品與服務,，助力我國打造自主可控的生物試劑產(chǎn)業(yè)鏈。同時,，翌圣生物將進一步推進國際化戰(zhàn)略,，繼續(xù)布局和拓展海外市場，為全球生物試劑產(chǎn)業(yè)發(fā)展貢獻力量,。
分子生物學試劑,，細胞生物學試劑，免疫學試劑,，蛋白組學試劑等
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1ml |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 20561ES03 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
HisSep Ni-NTA MagBeads His標簽蛋白純化磁珠 | 20561ES03 | 1 mL | 198.00 |
20561ES08 | 5 mL | 598.00 |
產(chǎn)品描述
His-tag蛋白純化磁珠是一種高容量的新型磁性微球產(chǎn)品,，用于快速、高效的純化 His標簽融合蛋白,。磁珠在磁場作用下直接從生物樣品中可一步純化出高達95%純度的目的蛋白,，極大的簡化了純化工藝和提高純化效率。將含有His標簽蛋白的細胞裂解物添加到MagBeads 中,，讓蛋白質(zhì)與其充分結(jié)合,，然后可從磁珠中洗脫分離出目的蛋白。
與傳統(tǒng)柱層析方法相比,，使用磁珠純化His標簽蛋白無需控制上樣流速和多次離心樣品,，也不需要昂貴的層析和離心設備。樣品與磁珠的結(jié)合以及目的蛋白與磁珠的分離簡單,、快捷,，而且更容易實現(xiàn)高通量、自動化的蛋白純化方法,。適合科研和工業(yè)客戶高通量地進行標簽蛋白的純化,。
該磁珠以4%瓊脂糖凝膠為基質(zhì)通過化學方法偶聯(lián)了四配位的氮川三乙酸(NTA)，螯合鎳離子(Ni2+)后，可以形成非常穩(wěn)定的八面體結(jié)構(gòu),，鎳離子處于八面體的中心,，這樣的結(jié)構(gòu)很有效的保護了鎳離子免受小分子的進攻更加穩(wěn)定。
His標簽蛋白純化磁珠廣泛適用于細菌,、酵母,、昆蟲和哺乳動物細胞等分泌或胞內(nèi)表達的可溶性標簽蛋白，也可用于變性蛋白的純化（包涵體需變性后再進行純化）,。
產(chǎn)品性質(zhì)
基質(zhì) | 磁性瓊脂糖微球 |
載量 | > 40 mg 6×His-tagged protein/mL磁珠 |
粒徑 | 30-100 μm |
磁珠濃度 | 磁珠懸浮于保護液中,，含量為20%（V/V) |
儲存緩沖液 | 含20%乙醇的1×PBS |
運輸和保存方法
冰袋運輸。4℃長期儲存,，有效期2年,。
注意事項
1.磁珠保存過程中避免冷凍、干燥和高速離心等操作,。
2.磁珠使用前,，請充分震蕩，使磁珠保持均勻的懸浮狀態(tài),。
3.使用過的磁珠重復使用時,，建議純化同一種蛋白，純化不同種蛋白時,，建議使用新磁珠,，以避免交叉污染。
4.為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。
5.本產(chǎn)品僅作科研用途！
使用方法
一,、緩沖液配制
1.緩沖液使用基本原理：低咪唑上樣,，高咪唑洗脫，或者高pH上樣,，低pH洗脫,。
2.Buffer在使用前最好用0.22 μm或者0.45 μm濾膜過濾除菌。
3.可溶性蛋白純化所需緩沖液及配方詳見附表1,，包涵體蛋白純化所需緩沖液及配方詳見附表2和表3,。
二、樣本制備
2.1細菌或酵母表達的蛋白
1）將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移到離心杯中,，7,000 rpm (7,500 xg)，離心15 min收集菌體,，然后按照菌體：Lysis Buffer=1: 10 （W/V）加入Lysis Buffer,，加入終濃度為1 mM的PMSF。同時可加入其他蛋白酶抑制劑,，但不能影響目的蛋白與磁珠的結(jié)合,。
2）加入,使其工作濃度為0.2-0.4 mg/mL,。如果表達的宿主細胞內(nèi)含pLysS或pLysE，可以不加,。
3）將菌體沉淀懸浮起來,，（如果菌液濃度高，也可考慮加入10 μg/mL RNase A和5 μg/mL DNase I）,混勻,，冰上超聲破碎細胞,，至菌液基本保持澄清。
4）將澄清的破碎液轉(zhuǎn)移至離心管中,，10,000 rpm (15,000 xg),，4℃離心20-30 min。 取上清,，置于冰上備用或-20℃保存,。
2.2酵母、昆蟲和哺乳細胞分泌表達可溶性蛋白
1）將細胞培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心杯中,，5,000 rpm (3,800 xg),，離心10 min，收集菌體得上清,，如上清中不含EDTA,、和還原劑等物質(zhì)，即可直接使用,；如含有EDTA,、和還原劑等物質(zhì)，需用Lysis Buffer透析才能上樣,。
2）對于大量體積的上清,，需加入硫酸銨沉淀濃縮后，然后用Lysis Buffer透析后才能上樣,。
2.3包涵體蛋白純化（變性條件）
1）將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移到離心杯中,，7,000 rpm (7,500 xg)，離心15 min收集菌體,，去掉上清,。
2）按照菌體：Lysis buffer（不含8M尿素）=1:10 (W/V)將菌體懸浮起來，混勻,，冰浴超聲破碎,。
3）將破碎液轉(zhuǎn)移至離心管中，10,000 rpm (15,000 xg),，4℃離心20-30 min,。去掉上清，步驟2和3可以重復一次。
4）按照菌體：Lysis buffer（含8M尿素）=1:10 (w/v)的比例將包涵體充分懸浮,。
三,、磁珠預處理
3.1 準備
將磁珠充分混勻，使用移液器取適量的磁珠懸浮液,，置于離心管中,，將離心管置于磁力架上，待溶液變澄清后,，用移液器吸棄上清,。
3.2平衡
將離心管從磁力架上取下來，加入與懸浮液等體積的Lysis Buffer,，使用槍頭反復吹打5-10次,，將離心管置于磁分離器上，待溶液變澄清后,，用移液器吸棄清液,，重復洗滌2次。
四,、磁珠與目的蛋白結(jié)合
4.1 結(jié)合
將含有目的蛋白的上清液加入到處理好的磁珠中,，顛倒混勻。將離心管置于混合儀上,，室溫旋轉(zhuǎn)孵育30 min （如果目標蛋白不穩(wěn)定,，建議2-8℃下孵育1 h）。
4.2 洗雜
將離心管置于磁分離器,，待溶液變澄清后,，用移液器移出上清液，保留上清液,，以備取樣檢測,。向離心管中加入2倍懸浮液體積的Wash Buffer，使用槍頭反復吹打5-10次,，將離心管置于磁分離器上,，待溶液變澄清后，用移液器吸取上清液,，保留,，以備取樣檢測。重復上述步驟2次,。
4.3 洗脫
建議將3-5倍磁珠體積的Elution Buffer加入到離心管中,，使用移液器輕輕吹打3-5次，混勻,，將離心管置于磁分離器上,，待溶液變澄清后,，用移液器吸取上清液，即為目的蛋白,。如有需要,，可以重復上述步驟1次,，以提高目的蛋白的回收量。用戶也可根據(jù)實驗結(jié)果調(diào)整緩沖液中的咪唑濃度,。
五,、磁珠保存
1. 向裝有磁珠的離心管中加入1 mL Elution Buffer，用移液器反復吹打3-5次,，使磁珠充分懸浮,，然后置于磁分離器，吸棄上清,，重復該操作2次。
2. 向離心管中加入1 mL去離子水,，用移液器反復吹打3-5次,，使磁珠充分懸浮，然后置于磁分離器,，吸棄上清，重復該操作2次,。
3. 向離心管中加入含20%乙醇的1×PBS,，使總體積為磁珠初始懸浮液體積，保存于2-8 ℃,。
六,、SDS-PAGE 檢測
將純化得到的樣品（包括原始樣品,、流出組分,、洗雜及洗脫組分）使用SDS-PAGE檢測純化效果。
表1. 可溶性His標簽蛋白純化所需緩沖液及配方
緩沖液名稱 | 配方 | 配制1L溶液所需各種試劑量 |
Lysis Buffer | 50 mM NaH2PO4 300 mM NaCl 10 mM imidazole NaOH調(diào)pH至8.0,，0.22 µm或0.45 µm過濾除菌 | NaH2PO4 ·2H2O 7.80 g NaCl 17.54 g Imidazole 0.68 g
|
Wash Buffer | 50 mM NaH2PO4 300 mM NaCl 20 mM imidazole NaOH調(diào)pH至8.0,，0.22 µm或0.45 µm過濾除菌 | NaH2PO4 ·2H2O 7.80 g NaCl 17.54 g Imidazole 1.36 g
|
Elution Buffer | 50 mM NaH2PO4 300 mM NaCl 250 mM imidazole NaOH調(diào)pH至8.0，0.22 µm或0.45 µm過濾除菌 | NaH2PO4 ·2H2O 7.80 g NaCl 17.54 g Imidazole 17.0 g
|
以上緩沖液適用于多數(shù)His標簽蛋白的純化,，客戶也可根據(jù)實驗結(jié)果調(diào)整緩沖液中的咪唑濃度,。
表2. 包涵體His標簽蛋白純化所需緩沖液及配方,pH洗脫方式
緩沖液名稱 | 配方 | 配制1L溶液所需各種試劑量 |
Lysis Buffer | 8 M Urea 100 mM NaH2PO4 100 mM Tris·HCl 鹽酸溶液調(diào)pH至8.0,，0.22 µm或0.45 µm過濾除菌 | Urea 480.50 g NaH2PO4 ·H2O 13.80 g Tris·Cl 12.10 g
|
Wash Buffer | 8 M Urea 100 mM NaH2PO4 100 mM Tris·HCl 鹽酸溶液調(diào)pH至6.3，0.22 µm或0.45 µm過濾除菌 | Urea 480.50 g NaH2PO4 ·H2O 13.80 g Tris·Cl 12.10 g |
Elution Buffer | 8 M Urea 100 mM NaH2PO4 100 mM Tris·HCl 鹽酸溶液調(diào)pH至4.5,，0.22 µm或0.45 µm過濾除菌 | Urea 480.50 g NaH2PO4 ·H2O 13.80 g Tris·Cl 12.10 g |
表3. 包涵體His標簽蛋白純化所需緩沖液及配方,咪唑洗脫方式
緩沖液名稱 | 配方 | 配制1L溶液所需各種試劑量 |
Lysis Buffer | 8 M Urea 50 mM NaH2PO4 300 mM NaCl 10 mM imidazole NaOH調(diào)pH至8.0,，0.22 µm或0.45 µm過濾除菌 | Urea 480.50 g NaH2PO4 ·2H2O 7.80 g NaCl 17.54 g Imidazole 0.68 g |
Wash Buffer | 8 M Urea 50 mM NaH2PO4 300 mM NaCl 20 mM imidazole NaOH調(diào)pH至8.0，0.22 µm或0.45 µm過濾除菌 | Urea 480.50 g NaH2PO4 ·2H2O 7.80 g NaCl 17.54 g Imidazole 1.36 g |
Elution Buffer | 8 M Urea 50 mM NaH2PO4 300 mM NaCl 250 mM imidazole NaOH調(diào)pH至8.0,，0.22 µm或0.45 µm過濾除菌 | Urea 480.50 g NaH2PO4 ·2H2O 7.80 g NaCl 17.54 g Imidazole 17.0 g |
表4. Ni NTA Magarose Beads試劑耐受情況
試劑種類 | 濃度 |
還原劑 | 5 mM DTE 1 mM DTT 20 mM β-mercaptoethanol 5 mM TCEP 10 mM reduced glutathione |
變性劑 | 8 M urea 6 M Gua-HCl |
去污劑 | 2% TritonTM X-100, nonionic 2% TweenTM20, nonionic 2% NP-40, nonionic 2% Cholate, anionic 1% CHAPS, zwitterionic |
其他類 | 500 mM imidazole 20% ethanol 50% glycerol 100 mM Na2SO4 1.5 M NaCl 1 mM EDTA 60 mM citrate |
HB220315
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