乳酸脫氫酶(LDH)細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒
- 公司名稱 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地 翌圣生物
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/2/7 13:51:48
- 訪問(wèn)次數(shù) 1762
聯(lián)系方式：曹女士400-6111-883 查看聯(lián)系方式
聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說(shuō)明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息，謝謝!
企業(yè)簡(jiǎn)介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白質(zhì)改造和酶進(jìn)化技術(shù)為驅(qū)動(dòng),，聚焦生命科學(xué)產(chǎn)業(yè)鏈上游核心原料，從事分子,、蛋白和細(xì)胞三大品類生物試劑的研發(fā),、生產(chǎn)與銷售的高新技術(shù)企業(yè)，通過(guò)打通分子酶,、蛋白,、抗體、核酸,、細(xì)胞的技術(shù)開(kāi)發(fā)路徑,，成為國(guó)內(nèi)少數(shù)同時(shí)覆蓋三大品類生物試劑、兼?zhèn)浜诵募夹g(shù)自主研發(fā)能力和規(guī)?；a(chǎn)能力的高新技術(shù)企業(yè),，產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究領(lǐng)域、診斷與檢測(cè)領(lǐng)域和生物醫(yī)藥領(lǐng)域,。
主營(yíng)業(yè)務(wù)
公司憑借在蛋白質(zhì)改造和酶進(jìn)化領(lǐng)域的技術(shù)優(yōu)勢(shì)和深耕生物試劑行業(yè)多年積累的豐富經(jīng)驗(yàn),，構(gòu)建了品質(zhì)優(yōu)良、類型齊全,、種類豐富的產(chǎn)品管線,。自公司成立以來(lái),，公司研發(fā)、生產(chǎn)和銷售的生物試劑超過(guò)3000種，涵蓋分子,、蛋白、細(xì)胞三大品類的生物試劑,，能夠滿足客戶多種類型生物試劑的一體化采購(gòu)需求,。公司核心產(chǎn)品覆蓋qPCR系列、NGS系列、逆轉(zhuǎn)錄系列,、核酸提取與純化系列,、PCR系列、分子克隆系列,、體外轉(zhuǎn)錄系列,、抗體、蛋白純化系列,、蛋白分析系列,、重組蛋白、細(xì)胞分析系列,、細(xì)胞培養(yǎng)系列,、細(xì)胞轉(zhuǎn)染系列、報(bào)告基因檢測(cè)系列等多個(gè)品類的生物試劑,，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究,、診斷檢測(cè)和生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。
發(fā)展歷程
榮譽(yù)資質(zhì)
翌圣生物通過(guò)申請(qǐng)商標(biāo)和軟件著作權(quán)的方式保障核心技術(shù)和市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力,，不斷加強(qiáng)公司品牌建設(shè),。截至2022年3月31日，公司已經(jīng)獲得授權(quán)18項(xiàng)（其中發(fā)明14項(xiàng),、實(shí)用新型1項(xiàng),、外觀設(shè)計(jì)3項(xiàng)）和45項(xiàng)與生物試劑相關(guān)的軟件著作權(quán)，擁有經(jīng)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局商標(biāo)局核準(zhǔn)的注冊(cè)商標(biāo)權(quán)37項(xiàng)以及4項(xiàng)境外注冊(cè)商標(biāo),，是國(guó)家高新技術(shù)企業(yè)和上海市專精特新企業(yè),。
創(chuàng)新平臺(tái)
經(jīng)過(guò)多年的產(chǎn)品研發(fā)技術(shù)經(jīng)驗(yàn)的沉淀以及持續(xù)的研發(fā)創(chuàng)新，翌圣生物積極開(kāi)展“產(chǎn)學(xué)研”合作,，與擁有生物催化與酶領(lǐng)域國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的湖北大學(xué),、擁有教育部工業(yè)生物領(lǐng)域重點(diǎn)研究基地的江南大學(xué)展開(kāi)合作，優(yōu)化生物試劑關(guān)鍵原料的生產(chǎn)和表達(dá)工藝,。翌圣生物以基因工程技術(shù),、生物信息技術(shù)、細(xì)胞生物學(xué)技術(shù),、免疫學(xué)技術(shù),、生化分析技術(shù)等生命科學(xué)領(lǐng)域的共性生物技術(shù)為基礎(chǔ)，建立了六大核心技術(shù)平臺(tái)——雙向分子酶理性設(shè)計(jì)與定向進(jìn)化平臺(tái),、密度發(fā)酵與超潔凈純化平臺(tái),、分子診斷試劑關(guān)鍵原料研發(fā)平臺(tái)、高通量測(cè)序建庫(kù)試劑創(chuàng)新研發(fā)平臺(tái),、高性能單克隆抗體研發(fā)平臺(tái)和mRNA醫(yī)藥應(yīng)用研發(fā)平臺(tái),，目前已經(jīng)自主研發(fā)出20項(xiàng)核心技術(shù)，打通分子酶、蛋白,、抗體,、核酸、細(xì)胞的技術(shù)開(kāi)發(fā)路徑,，覆蓋技術(shù)研發(fā),、產(chǎn)品升級(jí),、規(guī)模生產(chǎn)和質(zhì)量控制等生物試劑研發(fā)和生產(chǎn)的各關(guān)鍵環(huán)節(jié),。
工業(yè)化生產(chǎn)
翌圣生物擁有按照準(zhǔn)GMP 標(biāo)準(zhǔn)建設(shè)運(yùn)營(yíng)的工業(yè)化生產(chǎn)基地，配有噸級(jí)發(fā)酵線,、工業(yè)級(jí) AKTA 純化線和全自動(dòng)包裝線,。同時(shí)，公司通過(guò)了ISO 13485:2016質(zhì)量管理體系認(rèn)證,，從原料控制,、生產(chǎn)管理、質(zhì)檢管控,、倉(cāng)儲(chǔ)運(yùn)輸?shù)葘?duì)生產(chǎn)線進(jìn)行360度管理監(jiān)督,，保證產(chǎn)品過(guò)程的可控制性及可追溯性，竭盡全力為您提供可靠的產(chǎn)品,。
客戶服務(wù)
翌圣生物憑借優(yōu)質(zhì)穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量,、高效及時(shí)的響應(yīng)能力、快速穩(wěn)定的交付能力和周到完備的售后服務(wù)獲得了眾多科研用戶和工業(yè)用戶的認(rèn)可,，為檢測(cè)公司,、治療公司、工具類公司和科學(xué)研究實(shí)驗(yàn)室提供應(yīng)用于科學(xué)研究,、體外診斷,、基因測(cè)序、生物醫(yī)藥等的生物試劑,。與中國(guó)科學(xué)院,、清華大學(xué)、北京大學(xué),、復(fù)旦大學(xué),、上海交通大學(xué)、浙江大學(xué)等頂尖科研院所和華大基因,、恒瑞醫(yī)藥,、藥明康德、之江生物,、圣湘生物,、斯微生物、金斯瑞、思路迪等工業(yè)客戶建立了穩(wěn)定,、緊密的合作關(guān)系,，公司產(chǎn)品被多次使用在Nature、Science,、Cell等國(guó)際頂級(jí)期刊論文發(fā)表中,。
公司企業(yè)文化
幫助客戶創(chuàng)造價(jià)值，讓世界更健康更快樂(lè)
◎ 成為生命科學(xué)工具領(lǐng)域全球Top⑩
◎ 具備驅(qū)動(dòng)產(chǎn)業(yè)變革的技術(shù)創(chuàng)新能力
◎ 擁有一支持續(xù)學(xué)習(xí)型的翌圣鐵軍
翌圣生物始終秉承“幫助客戶創(chuàng)造價(jià)值,，讓世界更健康更快樂(lè)”的使命,，專注于技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品升級(jí)，不斷拓展核心技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域,，為客戶提供更為的產(chǎn)品與服務(wù),，助力我國(guó)打造自主可控的生物試劑產(chǎn)業(yè)鏈。同時(shí),，翌圣生物將進(jìn)一步推進(jìn)國(guó)際化戰(zhàn)略,，繼續(xù)布局和拓展海外市場(chǎng)，為全球生物試劑產(chǎn)業(yè)發(fā)展貢獻(xiàn)力量,。
分子生物學(xué)試劑,，細(xì)胞生物學(xué)試劑，免疫學(xué)試劑,，蛋白組學(xué)試劑等
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 500 T |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 40209ES76 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
乳酸脫氫酶(LDH)細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品描述
乳酸脫氫酶(LDH)細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit),，也稱乳酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒(LDH Assay Kit)或乳酸脫氫酶釋放檢測(cè)試劑盒(LDH Release Assay Kit)，是一種基于Diaphorase催化INT的顯色反應(yīng),，通過(guò)比色法檢測(cè)細(xì)胞毒性時(shí)釋放的乳酸脫氫酶活性或檢測(cè)其它樣品中的乳酸脫氫酶活性的試劑盒,。
檢測(cè)原理：LDH (乳酸脫氫酶）在胞漿內(nèi)含量豐富，正常時(shí)不能通過(guò)細(xì)胞膜,，當(dāng)細(xì)胞受損傷或死亡時(shí)可釋放到細(xì)胞外,，釋放出的LDH 在培養(yǎng)基上清中，可通過(guò)酶反應(yīng)來(lái)檢測(cè),。在乳酸脫氫酶的作用下,，NAD+被還原生成NADH，NADH和INT(a tetrazolium salt)被硫辛酰胺脫氫酶(Diaphorase)催化反應(yīng)生成NAD+和紅色的甲臜(Formazan),，甲臜的量與裂解的細(xì)胞數(shù)成正比,，在490 nm波長(zhǎng)下產(chǎn)生吸收峰，從而可以通過(guò)比色來(lái)定量乳酸脫氫酶的活性,。吸光度與乳酸脫氫酶活性成線性正相關(guān),。
以前使用放射性的51Cr標(biāo)記細(xì)胞，隨后通過(guò)51Cr釋放進(jìn)行細(xì)胞膜完整性檢測(cè),，而LDH釋放顯然是一種更為安全有效的替代方法,。本試劑盒可以用于常規(guī)的乳酸脫氫酶活性的檢測(cè),，更常用于以LDH釋放為指標(biāo)的細(xì)胞毒性檢測(cè)。同時(shí),，基于細(xì)胞總?cè)樗崦摎涿富钚缘臋z測(cè),，本試劑盒也可以用于檢測(cè)細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)。
本試劑盒可檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液,、細(xì)胞裂解液等樣品中乳酸脫氫酶的活性,。一個(gè)試劑盒可進(jìn)行500次檢測(cè)。
圖 LDH檢測(cè)試劑盒原理示意圖
產(chǎn)品組分
組分編號(hào) | 組分名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格（500 T） | 儲(chǔ)存方法 |
40209-A | Cell Lysis Buffer 細(xì)胞裂解液 | 7.5 mL | -20℃ |
40209-B | Substrate Mix 反應(yīng)底物 | 10 mL | -20℃ |
40209-C | INT Substrate Solution (10×) INT溶液（10×） | 1 mL | -20℃避光 |
40209-D | INT Dilution Buffer INT稀釋液 | 10 mL | -20℃ |
40209-E | Enzyme Solution 酶溶液 | 5 mL×2 | -20℃,，避免反復(fù)凍融 |
保存條件
冰袋運(yùn)輸,。-20℃保存，1年有效,。其中酶溶液避免反復(fù)凍融,，INT溶液(10×)需避光保存,。
注意事項(xiàng)
1）建議樣品準(zhǔn)備好后盡量當(dāng)天完成測(cè)定,。冷凍會(huì)使樣品中部分乳酸脫氫酶失活，4℃可放置2-3天,。
2）由于血清含有乳酸脫氫酶,，建議血清的使用濃度不要超過(guò)1%，并最好使用熱滅活血清,。如果一定需要使用10%血清,，在檢測(cè)時(shí)一定要設(shè)置沒(méi)有細(xì)胞，但加入了相同體積培養(yǎng)液的對(duì)照孔,，以用于消除背景,。
3）細(xì)胞過(guò)度生長(zhǎng)、密度過(guò)高,、離心速度過(guò)大,、培養(yǎng)箱內(nèi)外溫差過(guò)大，都會(huì)造成細(xì)胞釋放乳酸脫氫酶增加,。
4）如果希望進(jìn)行乳酸脫氫酶活性的絕對(duì)定量,，需自備乳酸脫氫酶標(biāo)準(zhǔn)品。
5）操作過(guò)程中避免氣泡的出現(xiàn),，氣泡會(huì)影響吸光值讀數(shù),。
6）吸取細(xì)胞時(shí)避免需溫和操作，力度過(guò)大會(huì)造成自發(fā)性LDH釋放,，影響讀數(shù),。
7）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。
8）本產(chǎn)品僅作科研用途,！
使用說(shuō)明
1. 樣品準(zhǔn)備：
（一）LDH釋放檢測(cè)
① 根據(jù)細(xì)胞的大小和生長(zhǎng)速度將適量細(xì)胞接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,，使待檢測(cè)時(shí)細(xì)胞密度不超過(guò)80-90%。
② 吸去培養(yǎng)液,，用PBS液洗滌一次,。更換新鮮培養(yǎng)液(推薦使用含1%血清的低血清培養(yǎng)液或適當(dāng)?shù)臒o(wú)血清培養(yǎng)液)，將各培養(yǎng)孔分成如下幾組：無(wú)細(xì)胞的培養(yǎng)液孔(背景空白對(duì)照孔),，未經(jīng)藥物處理的對(duì)照細(xì)胞孔(樣品對(duì)照孔),，未經(jīng)藥物處理的用于后續(xù)裂解的細(xì)胞孔(樣品最大酶活性對(duì)照孔)，以及藥物處理的細(xì)胞孔(藥物處理樣品孔),，并做好標(biāo)記,。按照實(shí)驗(yàn)需要給予適當(dāng)藥物處理(如加入0-10 μL左右特定的藥物刺激，可設(shè)置不同濃度,，不同處理時(shí)間,，對(duì)照孔中需加入適當(dāng)?shù)乃幬锶軇?duì)照)，繼續(xù)按常規(guī)培養(yǎng),。到預(yù)定的檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)前1小時(shí),，從細(xì)胞培養(yǎng)箱里取出細(xì)胞培養(yǎng)板，在“樣品最大酶活性對(duì)照孔”中加入試劑盒提供的細(xì)胞裂解液,，加入量為原有培養(yǎng)液體積的10%,。加入細(xì)胞裂解液后，反復(fù)吹打數(shù)次混勻,，然后繼續(xù)在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育,。
③ 到達(dá)預(yù)定時(shí)間后，將細(xì)胞培養(yǎng)板用多孔板離心機(jī)400 g離心5 min,。分別取各孔的上清液120 μL,，加入到一新的96孔板相應(yīng)孔中，隨即進(jìn)行樣品測(cè)定,。
（二）細(xì)胞內(nèi)總LDH的檢測(cè)
① 細(xì)胞毒性檢測(cè)：根據(jù)細(xì)胞的大小和生長(zhǎng)速度將適量細(xì)胞接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)孔板中,，使待檢測(cè)時(shí)細(xì)胞密度不超過(guò)80-90%。加入不同藥物進(jìn)行處理,，并設(shè)置適當(dāng)對(duì)照,。藥物刺激完畢后，將細(xì)胞培養(yǎng)板用多孔板離心機(jī)400 g離心5 min,。盡量吸除上清,，加入150 μL用PBS稀釋了10倍的試劑盒提供的細(xì)胞裂解液(10體積PBS中加入1體積細(xì)胞裂解液并混勻)，適當(dāng)搖晃培養(yǎng)板混勻,，然后繼續(xù)在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育1小時(shí),。隨后將細(xì)胞培養(yǎng)板用多孔板離心機(jī)400 g離心5 min。分別取各孔的上清液120 μL,，加入到一新的96孔板相應(yīng)孔中,，隨即進(jìn)行樣品測(cè)定,。
② 細(xì)胞增殖檢測(cè)：根據(jù)細(xì)胞的大小和生長(zhǎng)速度將適量細(xì)胞接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)孔板中，使促進(jìn)細(xì)胞增殖的藥物刺激后細(xì)胞不超過(guò)80-90%為宜,。使用不同的藥物刺激細(xì)胞,，并設(shè)置適當(dāng)對(duì)照。藥物刺激完畢后,，將細(xì)胞培養(yǎng)板用多孔板離心機(jī)400g離心5 min,。盡量吸除上清，加入150 μL用PBS稀釋了10倍的試劑盒提供的細(xì)胞裂解液(10體積PBS中加入1體積細(xì)胞裂解液并混勻),，適當(dāng)搖晃混勻,，然后繼續(xù)在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育1小時(shí)。隨后將細(xì)胞培養(yǎng)板用多孔板離心機(jī)400 g離心5 min,。分別取各孔上清液120 μL,，加入到一新的96孔板相應(yīng)孔中，隨即進(jìn)行樣品測(cè)定,。
【注】：LDH釋放檢測(cè)更加常用一些,，細(xì)胞內(nèi)總LDH檢測(cè)通常可以使用MTT,、WST-1或CCK-8等方法替代,。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：
① INT溶液(1×)的配置：根據(jù)所需的INT溶液(1×)的量,，取適量INT溶液(10×)用INT稀釋液稀釋至1×,。例如，取20 μL INT溶液(10×),，加入180 μL INT稀釋液,，混勻后即為200 μL INT溶液(1×)。INT溶液(1×)宜現(xiàn)配現(xiàn)用,，配置后4℃保存可于當(dāng)天使用,，不宜配置后凍存。
② LDH檢測(cè)工作液的配制：根據(jù)待測(cè)定的樣品數(shù)(含對(duì)照),，參考下表在臨檢測(cè)前新鮮配制適量的檢測(cè)工作液,。【注】：LDH檢測(cè)工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用,，配制和使用過(guò)程中均要注意適當(dāng)避光,。
檢測(cè)次數(shù) | 1次 | 10次 | 20次 | 50次 |
反應(yīng)底物 | 20 μL | 200 μL | 400 μL | 1 mL |
INT溶液(1×) | 20 μL | 200 μL | 400 μL | 1 mL |
酶溶液 | 20 μL | 200 μL | 400 μL | 1 mL |
總體積 | 60 μL | 600 μL | 1.2 mL | 3 mL |
③（選做）如果希望進(jìn)行LDH酶活性的絕對(duì)定量，需自備LDH標(biāo)準(zhǔn)品,，并新鮮配制不同濃度LDH標(biāo)準(zhǔn)品,，如10mU/mL、 5 mU/mL,、2.5 mU/mL,、1.25 mU/mL,、0.65 mU/mL、0 mU/mL,。
3. 樣品測(cè)定
① 各孔分別加入60 μL LDH檢測(cè)工作液,。
② 混勻，室溫(約25℃) 避光孵育30 min(可用鋁箔包裹后置于水平搖床或側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)),。然后在490 nm處測(cè)定吸光度,。使用600 nm或大于600 nm的任一波長(zhǎng)作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。
③ 計(jì)算(測(cè)得的各組吸光度均應(yīng)減去背景空白對(duì)照孔吸光度)
細(xì)胞毒性或死亡率(%)=(處理樣品吸光度－樣品對(duì)照孔吸光度) / (細(xì)胞最大酶活性的吸光度－樣品對(duì)照孔吸光度)×100
④ 可繪制細(xì)胞毒性曲線：縱座標(biāo)為實(shí)際吸光度,，橫坐標(biāo)為藥物濃度,；據(jù)此可計(jì)算該藥物作用特定時(shí)間的半致死劑量LD50。
【附1 LDH酶活性的相對(duì)定量】：
可同時(shí)測(cè)定一已知濃度的LDH酶標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)的吸光度值,，參考以下公式粗略計(jì)算出樣品中LDH酶活力：
待測(cè)樣品中LDH活力單位(mU/mL)＝(樣品孔OD490－背景空白對(duì)照孔OD490) / (標(biāo)準(zhǔn)管OD490－標(biāo)準(zhǔn)空白管OD490)×標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mU/mL),；根據(jù)計(jì)算結(jié)果可以比較不同樣品處理組間有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異等。
【附2 LDH酶活性的絕對(duì)定量】：
若需準(zhǔn)確計(jì)算出LDH酶活性的絕對(duì)活性,，可通過(guò)一系列LDH標(biāo)準(zhǔn)品及相應(yīng)測(cè)得的吸光度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線相應(yīng)公式計(jì)算出樣品中LDH的酶活性。
各孔數(shù)值減去空白對(duì)照后,，以檢測(cè)的吸光度(OD490)為縱坐標(biāo),，LDH酶活力(mU)為橫坐標(biāo)，繪制LDH標(biāo)準(zhǔn)曲線,。同時(shí)計(jì)算出該趨勢(shì)線的公式,。
A490nm＝k×LDH酶活力單位(mU)＋b，通過(guò)Excel等軟件計(jì)算出趨勢(shì)線的斜率k和截距b,。
根據(jù)上述公式計(jì)算樣品中LDH活力,。
樣品實(shí)際吸光度(OD490)＝樣品孔OD490－背景空白對(duì)照孔OD490
檢測(cè)體系中LDH酶活力單位(mU)=(OD490-b)/k
樣品中LDH酶活力(mU/mL)＝檢測(cè)體系中LDH酶活力單位(mU )/檢測(cè)樣品體積
HB210525
采購(gòu)中心
化工儀器網(wǎng)