40740ES50 線粒體紅色熒光探針
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型號(hào) 40740ES50
- 產(chǎn)地 上海
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2022/2/10 14:57:42
- 訪問次數(shù) 443
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50ug |
---|---|---|---|
貨號(hào) | 40740ES50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品編號(hào)
規(guī)格
價(jià)格(元)
MitoTracker® Red CM-H2XRos線粒體紅色熒光探針
40740ES50
50 µg
425.00
產(chǎn)品描述
MitoTracker® Red CM-H2XRos是一種細(xì)胞滲透型的dihydro-X-rosamine衍生物,,包含標(biāo)記線粒體的弱巰基反應(yīng)性的氯甲基官能團(tuán)。本品是一種還原型的紅色熒光染料(Ex=579 nm,,Em=599 nm),,本身不發(fā)熒光。只需簡(jiǎn)單孵育細(xì)胞,,即可被動(dòng)運(yùn)輸穿過細(xì)胞膜,,進(jìn)入細(xì)胞后被氧化為發(fā)熒光且具線粒體選擇性的探針,聚集在活性線粒體上。一旦線粒體被染色后,,還能根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的需求進(jìn)行固定(醛類固定劑如甲醛)和透化(醛類去污劑如Triton X-100),,探針依然維持在細(xì)胞內(nèi)。本品適合雙標(biāo)實(shí)驗(yàn),,因其紅色熒光與其他的綠色熒光探針具有良好的分辨率,。
雖然傳統(tǒng)的線粒體熒光探針如TMR和羅丹明123,也能很容易的聚集在功能線粒體上,,但是一旦線粒體膜電位喪失即會(huì)被洗掉,,從而在一些需要細(xì)胞進(jìn)行醛類固定或者包含線粒體能量狀態(tài)影響因子的實(shí)驗(yàn)中,使其應(yīng)用大受限制,。
產(chǎn)品性質(zhì)
CAS號(hào)(CAS NO.)
167095-08-1
分子式(Molecular Formula)
C32H33ClN2O
分子量(Molecular Weight)
497.08
Ex/Em
579/599 nm
外觀(Appearance)
紫色固體
結(jié)構(gòu)式(Structure)
運(yùn)輸和保存方法
室溫運(yùn)輸,;-20℃避光干燥保存,有效期1年,。
使用方法
1. 儲(chǔ)存液的配制
本品是以粉末形式提供,,使用前需將本品回溫至室溫。
之后使用細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別的無水DMSO(如Yeasen,,貨號(hào):60313ES60)將其充分溶解至終濃度1 mM,。
本品M. Wt.= 497.08 g/mol,換算下來,,50 µg粉末只需加入100.6 µL DMSO即可得到1 mM儲(chǔ)存液,。根據(jù)單次的使用量將儲(chǔ)存液分裝后放到-20℃避光,避免反復(fù)凍融,。特別注意:由于本品是還原型的化合物,,對(duì)氧氣相當(dāng)敏感,特別是在溶液中,,為了保持產(chǎn)品的穩(wěn)定性,,產(chǎn)品分裝后充氮?dú)饣蛘邭鍤獾榷栊詺怏w以防止在凍存的過程中被氧化。
2. 工作液的配制
根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖褂貌煌奶结槤舛?,以下的起始操作條件僅作參考,,可根據(jù)細(xì)胞類型和其他的相關(guān)因素如細(xì)胞或組織的透化等進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。
用適當(dāng)?shù)木彌_液或細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋1 mM儲(chǔ)存液至工作液濃度,。一般推薦使用濃度為25-500 nM,。對(duì)于后續(xù)需要做固定或透化的樣本,推薦工作濃度為100-500 nM,,為了降低過度加載導(dǎo)致的潛在偽影和線粒體毒性,,在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的前提下應(yīng)盡可能低濃度染色。另外,,濃度過高也可能對(duì)其他細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行染色,。
注意:1)本品MitoTracker® Red CM-H2XRos是還原型的熒光探針,,使用的工作液濃度比氧化型(MitoTracker® Red CM-XRos)的濃度一般高3~5倍。以上推薦的濃度是針對(duì)氧化型MitoTracker® Red CM-XRos,,請(qǐng)使用本品(還原型)時(shí)進(jìn)行適當(dāng)?shù)臐舛日{(diào)整,。2)血清中可能含氧化酶,影響本還原型探針的穩(wěn)定性,,因此,,不建議使用含血清的*培養(yǎng)基稀釋儲(chǔ)存液。
3. 染色及檢測(cè)
1)貼壁細(xì)胞的染色
培養(yǎng)皿/板內(nèi)加入適量的培養(yǎng)基覆蓋蓋玻片進(jìn)行爬片培養(yǎng),。當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)至所需豐度,,吸除培養(yǎng)液,加入37℃預(yù)熱的MitoTracker® Red CM-H2XRos染色工作液,。在所使用細(xì)胞正常培養(yǎng)條件下孵育15-45 min(最佳孵育時(shí)間需優(yōu)化),。染色結(jié)束后,使用新鮮培養(yǎng)液或緩沖液替換上述染色液,,即可將其置于熒光顯微鏡下觀察或熒光酶標(biāo)儀下讀數(shù),。或者進(jìn)行后續(xù)的固定和透化步驟,,見步驟4,。
2)懸浮細(xì)胞的染色
離心收集細(xì)胞,吸除上清,,利用37℃預(yù)熱的MitoTracker® Red CM-H2XRos染色工作液輕輕重懸細(xì)胞,。在所使用細(xì)胞正常培養(yǎng)條件下孵育15-45 min(最佳孵育時(shí)間需優(yōu)化)。染色結(jié)束后,,離心收集細(xì)胞,,利用37℃預(yù)熱的新鮮培養(yǎng)液或緩沖液重懸細(xì)胞,被染色的細(xì)胞可用流式細(xì)胞儀,、熒光酶標(biāo)儀,、熒光顯微鏡進(jìn)行分析。
如果需要蓋玻片上固定化的細(xì)胞,,那么可在鋪片前先用多聚賴氨酸(poly-D-lysine)包被載玻片或蓋玻片,。
或者進(jìn)行后續(xù)的固定和透化步驟,見步驟4,。
4. 固定和透化
1)染色結(jié)束后,,利用培養(yǎng)液或緩沖液清洗細(xì)胞;
2)小心吸走清洗液,。換用新鮮配制且預(yù)熱的含2-4%甲醛的緩沖液或培養(yǎng)液進(jìn)行細(xì)胞固定,。經(jīng)驗(yàn)證, 本染料MitoTracker® Red CM-H2XRos由含3.7%甲醛的*培養(yǎng)液于37℃孵育內(nèi)皮細(xì)胞15 min能起到良好的固定效果,。
3)清洗細(xì)胞:吸除固定液,用適當(dāng)緩沖液沖洗細(xì)胞數(shù)次。
4)細(xì)胞透化(可選):
像ICC等實(shí)驗(yàn)需要細(xì)胞要做透化,,則可將已固定的細(xì)胞直接加入含有去污劑如Triton X-100的緩沖液中孵育,。透化結(jié)束后,用緩沖液清洗細(xì)胞即可進(jìn)行后續(xù)ICC實(shí)驗(yàn),。經(jīng)檢測(cè),,利用含0.2% Triton X-100的PBS孵育內(nèi)皮細(xì)胞10 min可以達(dá)到良好的透化效果。
另外,,還可利用預(yù)冷的丙酮透化5 min,,之后用PBS清洗細(xì)胞。經(jīng)驗(yàn)證,,即使后繼沒有進(jìn)一步的抗體標(biāo)記,,丙酮透化處理也可降低背景信號(hào)。
注意事項(xiàng)
1)DMSO有毒,,使用時(shí)請(qǐng)小心操作,。
2)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。
3)本產(chǎn)品僅作科研用途,!
HB211230