40743ES50 線(xiàn)粒體深紅色熒光探針
- 公司名稱(chēng) 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型號(hào) 40743ES50
- 產(chǎn)地 上海
- 廠(chǎng)商性質(zhì) 生產(chǎn)廠(chǎng)家
- 更新時(shí)間 2022/2/10 14:57:53
- 訪(fǎng)問(wèn)次數(shù) 545
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50ul |
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貨號(hào) | 40743ES50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱(chēng)
產(chǎn)品編號(hào)
規(guī)格
價(jià)格(元)
MitoTracker®Deep Red FM 線(xiàn)粒體深紅色熒光探針
40743ES50
50 µg
425.00
產(chǎn)品描述
MitoTracker® Deep Red FM是一種細(xì)胞滲透型的carbocyanine-based的深紅外紅色熒光探針(Ex=644 nm,,Em=665 nm),包含標(biāo)記線(xiàn)粒體的弱巰基反應(yīng)性的氯甲基官能團(tuán),,只需簡(jiǎn)單孵育細(xì)胞,,即可被動(dòng)運(yùn)輸穿過(guò)細(xì)胞膜并直接聚集在活性線(xiàn)粒體上。一旦線(xiàn)粒體被染色后,,還能根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的需求進(jìn)行固定(醛類(lèi)固定劑如甲醛)和透化(醛類(lèi)去污劑如Triton X-100),,探針依然維持在細(xì)胞內(nèi)。本品適合雙標(biāo)實(shí)驗(yàn),,因其紅色熒光與其他的綠色熒光探針具有良好的分辨率,。
雖然傳統(tǒng)的線(xiàn)粒體熒光探針如TMR和羅丹明123,也能很容易的聚集在功能線(xiàn)粒體上,,但是一旦線(xiàn)粒體膜電位喪失即會(huì)被洗掉,,從而在一些需要細(xì)胞進(jìn)行醛類(lèi)固定或者包含線(xiàn)粒體能量狀態(tài)影響因子的實(shí)驗(yàn)中,使其應(yīng)用大受限制,。
產(chǎn)品性質(zhì)
CAS號(hào)(CAS NO.)
N/A
分子式(Formula)
C34H36Cl2N2
分子量(Molecular weight)
543.58
外觀(guān)(Appearance)
Blue solid
激發(fā)波長(zhǎng)(Ex)
644 nm
發(fā)射波長(zhǎng)(Em)
665 nm
結(jié)構(gòu)式(Structure)
運(yùn)輸和保存方法
室溫運(yùn)輸,;-20℃避光干燥保存,,有效期1年,。
使用方法
1. 儲(chǔ)存液的配制
本品是以粉末形式提供,使用前需將本品回溫至室溫,。
之后使用細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別的無(wú)水DMSO(如Yeasen,,貨號(hào):60313ES60)將其充分溶解至終濃度1 mM,。
本品M. Wt.= 543.58 g/mol,換算下來(lái),,50 µg粉末只需加入92 µL DMSO即可得到1 mM儲(chǔ)存液,。
可根據(jù)單次的使用量將儲(chǔ)存液分裝后放到-20℃避光,避免反復(fù)凍融,。
2. 工作液的配
根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖褂貌煌奶结槤舛?,以下的起始操作條件僅作參考,可根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型和其他的相關(guān)因素如細(xì)胞或組織的透化等進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整,。
用適當(dāng)?shù)木彌_液或者細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋1 mM儲(chǔ)存液至工作液濃度,。一般推薦使用濃度為25-500 nM。對(duì)于后續(xù)需要做固定或透化的樣本,,推薦工作濃度為100-500 nM,,為了降低過(guò)度加載導(dǎo)致的潛在偽影和線(xiàn)粒體毒性,在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的前提下應(yīng)盡可能低濃度染色,。另外,,濃度過(guò)高也可能對(duì)其他細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行染色。
3. 染色及檢測(cè)
1)貼壁細(xì)胞的染色
培養(yǎng)皿/板內(nèi)加入適量的培養(yǎng)基覆蓋蓋玻片進(jìn)行爬片培養(yǎng),。當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)至所需豐度,,吸除培養(yǎng)液,加入37℃預(yù)熱的MitoTracker® Deep Red FM染色工作液,。在所使用細(xì)胞正常培養(yǎng)條件下孵育15-45 min(最佳孵育時(shí)間需優(yōu)化),。染色結(jié)束后,使用新鮮培養(yǎng)液或緩沖液替換上述染色液,,即可將其置于熒光顯微鏡下觀(guān)察或熒光酶標(biāo)儀下讀數(shù),。或者進(jìn)行后續(xù)的固定和透化步驟,,見(jiàn)步驟4,。
2)懸浮細(xì)胞的染色
離心收集細(xì)胞,吸除上清,,利用37℃預(yù)熱的MitoTracker® Deep Red FM染色工作液輕輕重懸細(xì)胞,。在所使用細(xì)胞正常培養(yǎng)條件下孵育15-45 min(最佳孵育時(shí)間需優(yōu)化)。染色結(jié)束后,,離心收集細(xì)胞,,利用37℃預(yù)熱的新鮮培養(yǎng)液或緩沖液重懸細(xì)胞,被染色的細(xì)胞可用流式細(xì)胞儀,、熒光酶標(biāo)儀,、熒光顯微鏡進(jìn)行分析。
如果需要蓋玻片上固定化的細(xì)胞,,那么可在鋪片前先用多聚賴(lài)氨酸(poly-D-lysine)包被載玻片或蓋玻片,。
或者進(jìn)行后續(xù)的固定和透化步驟,,見(jiàn)步驟4。
4. 固定和透化
1)染色結(jié)束后,,利用培養(yǎng)液或緩沖液清洗細(xì)胞,;
2)小心吸走清洗液。換用新鮮配制且預(yù)熱的含2-4%甲醛的緩沖液或培養(yǎng)液進(jìn)行細(xì)胞固定,。
3)清洗細(xì)胞:吸除固定液,,用適當(dāng)緩沖液沖洗細(xì)胞數(shù)次。
4)細(xì)胞透化(可選):
像ICC等實(shí)驗(yàn)需要細(xì)胞要做透化,,則可將已固定的細(xì)胞直接加入含有去污劑如Triton X-100的緩沖液中孵育,。透化結(jié)束后,用緩沖液清洗細(xì)胞即可進(jìn)行后續(xù)ICC實(shí)驗(yàn),。經(jīng)檢測(cè),,利用含0.2% Triton X-100的PBS孵育內(nèi)皮細(xì)胞10 min可以達(dá)到良好的透化效果。
另外,,還可利用預(yù)冷的丙酮透化5 min,,之后用PBS清洗細(xì)胞。經(jīng)驗(yàn)證,,即使后繼沒(méi)有進(jìn)一步的抗體標(biāo)記,,丙酮透化處理也可降低背景信號(hào)。
注意事項(xiàng)
1)DMSO有毒,,使用時(shí)請(qǐng)小心操作,。
2)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。
3)本產(chǎn)品僅作科研用途,!
HB211230