（一）倒置顯微鏡下直接觀察細胞形態(tài)

細胞形態(tài)變化包括：細胞核、細胞膜和細胞質(zhì)的改變,，即細胞是否有空泡積累和脂質(zhì)小滴,、是否可見細胞膜膨出（鼓泡）、細胞核染色質(zhì)的變化以及細胞器如線粒體,、溶酶體等的變化,、細胞脫壁和貼壁、細胞膜表面是否毛糙無光澤,、細胞是否裂解為碎片等,。通過細胞形態(tài)的這些變化，可直觀快速地判斷細胞毒性,。

（二）透射電子顯微鏡觀察

【材料】

1. 2％～3％瓊脂糖,。

2. 2％～2.5％戊二醛。

3. 1％四氧化*,。

4. 0.2M PBS緩沖液,。

5．梯度丙酮。分別為50%,70%,90%,100％濃度的丙酮,。

【方法】

1．收集對數(shù)生長期的培養(yǎng)細胞5x107左右,。將細胞連同培養(yǎng)液放入2ml的離心管中，然后用PBS清洗2～3次，1000～1500r/min離心樣品5～10分鐘,，吸去上清液,，混勻細胞。

2．沿管壁小心加入2％～2.5％的冷戊二醛,，輕輕吹打,，使細胞混勻。在4℃的環(huán)境中固定30分鐘,，然后用指彈法將細胞團塊彈散,，繼續(xù)用新的固定液固定細胞30分鐘。1000r/min離心5分鐘,，棄上清液,。

3．在4℃下用PBS沖洗后放置1～2小時或者過夜，離心后棄上清液,。

4．管內(nèi)加入0.1～0.5m1 37℃的2％～4％的瓊脂糖液,，混勻并冷卻，形成細胞瓊脂凝膠預(yù)包埋塊,。

5．離心管中加入少量的PBS或者75％的乙醇,，用鋁片沿管壁小心地將細胞瓊脂糖松動，預(yù)包埋塊移到含有75％乙醇的青霉素瓶中,，一天后換固定液一次,。4℃保存。

6．將預(yù)包埋塊切成1 mm3大小,，放到1％四氧化*中4℃固定1～ 2小時,。用PBS反復(fù)漂洗后放置30分鐘或過夜。

7．分別用50%,70%,90%,100％的丙酮脫水一次,，每次10～15分鐘；然后100％丙酮脫水3次,，每次30分鐘,。

8．浸入稀釋包埋劑（丙酮：包埋劑=1:1)中，室溫1小時,。再放到純包埋劑中,，37℃過夜。然后60℃固定48小時,。放置于干燥器中備用,。

9．將樣品放到電子顯微鏡進行透視觀察。

（三）掃描電子顯微鏡觀察

培養(yǎng)細胞電鏡掃描觀察非常方便,；在觀察鐵壁細胞時也需要進行消化,，制備成細胞懸液后，用Hanks液漂洗1到2次后，除去細胞碎塊和血清蛋白,，以防妨礙觀察,。

【材料】

1. 1.5％戊二醛。

2. 0.2M PBS緩沖液,。

3. 50%,70%,90%,95%,100％的梯度乙醇,。

4. 1％四氧化*（Os04)。

5．丙酮,。

【方法】

1．單層細胞蓋玻片培養(yǎng)物冷漂洗后,，用1.5％戊二醛4℃固定1～2小時。PBS液清洗3次,，每次10分鐘,。

2．在4℃下用1 % OSO4固定1小時，然后用PBS緩沖液清洗3次,，每次10分鐘,。

3．分別用50%,70%,90%,95%,100％的乙醇依次脫水，每個濃度的乙醇脫水2次,，每次15分鐘,。

4. 100％丙酮脫水3次，每次30分鐘,。

5．將標(biāo)本在4℃下用丙酮保存,。

6．用掃描電子顯微鏡觀察。