通用SP檢測(cè)試劑盒 (兔小鼠通用)

本試劑盒適合于一抗為小鼠/兔 IgG 的免疫組化實(shí)驗(yàn) DAB 顯色,。
SP 試劑盒是專為免疫組化和其他免疫檢測(cè)而設(shè)計(jì)的,，用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì),，同親和素一樣,，對(duì)生物素有*的親和力，親和素是一個(gè)堿性蛋白質(zhì)（PI=10），經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì),。鏈霉親和素等電點(diǎn)接近中性,，對(duì)組織和細(xì)胞的非特異吸附很低，因此基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低,。
操作步驟:（以石蠟切片為例）
1. 切片常規(guī)脫蠟至水(三次二甲苯,，三次乙醇)。
2. 3% H2O2 室溫處理 5-10 分鐘以滅活內(nèi)源性酶,。蒸餾水洗 3 次,。
3.可選步聚：
a、熱修復(fù)抗原,，將切片浸入 0.01M 檸檬酸鈉緩沖液（PH6.0）,，電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電，間隔 5-10 分鐘后,，反復(fù) 1-2 次,。冷卻后 PBS（pH7.2-7.6）洗滌 1-2 次。
b,、酶消化,，滴加消化液，37℃10 分鐘,，PBS（pH7.2-7.4）洗滌 2-3 次,。
c、跳過此步,，直接進(jìn)入下一步,。
4. 滴加封閉液，室溫 20 分鐘,。甩去多余液體,，免洗。
5. 用稀釋液將一抗按一定比例稀釋（稀釋后的一抗 4℃可保存一周）,，也可另行購(gòu)買抗體稀釋液,。滴加稀釋的一抗 37℃ 孵育 1 小時(shí)左右或 20℃ 2 小時(shí)左右，也可 4℃過夜,。PBS（pH7.2-7.4）洗滌 3次,，每次 2 分鐘。（一抗的稀釋度,、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度,、背景有直接關(guān)系。一般來說,，陽(yáng)性染色強(qiáng)度不夠時(shí),，可提高一抗?jié)舛群脱娱L(zhǎng)孵育時(shí)間,；背景過高時(shí)，可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間,。）
6． 根據(jù)用量,，用稀釋液將 Bio-羊抗小鼠/兔 IgG 濃縮液按 1:100 稀釋成工作液(1ml 稀釋液加入 10ulBio-羊抗小鼠/兔 IgG 濃縮液混勻，此工作液 4℃可保存一周),。滴加 Bio-羊抗小鼠/兔 IgG 工作液,，20-37℃ 孵育 30 分鐘,。PBS（pH7.2-7.4）洗滌 3 次,，每次 2 分鐘。
7．根據(jù)使用量,，用稀釋液將鏈酶親和素-POD 濃縮液按 1:100 稀釋成工作液(1ml 稀釋液加入 10ul鏈酶親和素-POD 濃縮液混勻,，此工作液 4℃可保存一周)。滴加鏈酶親和素-POD 工作液,，20-37℃,，30 分鐘。PBS （pH7.2-7.4）洗滌 4 次,，每次 5 分鐘,。
8．DAB 顯色：根據(jù)用量，用 PBS（pH7.2-7.4）配制,，按 1ml PBS 加入 50ul 20×DAB 顯色液 A,，加入 50ul 20×DAB 顯色液 B 。充分混勻后滴加到切片上,。室溫顯色,，鏡下控制反應(yīng)時(shí)間，一般在 5-30分鐘之間,。蒸餾水洗滌終止反應(yīng),。
9．蘇木素輕度復(fù)染。脫水,，透明,，封片。顯微鏡觀察,。對(duì)于細(xì)胞爬片,，固定后，PBS 漂洗兩次,，再用 0.5% Triton X-100 室溫孵育 20 分鐘,，PBS 漂洗兩次，3% H2O2 處理 15 分鐘,；PBS 漂洗兩次,，接上述第 4 步。對(duì)于冰凍切片，固定后,，PBS 漂洗兩次,，接上述第二步。
注意事項(xiàng)：
如果染色背景過高,，在 SP 反應(yīng)之后,，DAB 顯色之前，用加有 0.01—0.02% TWEEN-20 的 PBST（pH7.2-7.4）洗滌切片 4 次,，PBS 洗 2 次,，然后 DAB 顯色。

通用SP檢測(cè)試劑盒 (兔小鼠通用)