超低分子量蛋白質(zhì)Marker（3.3-20.1kD）使用說(shuō)明書(shū)

貨號(hào):MP1003

規(guī)格:15T

保存:-20℃保存,，有效期為一年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

本產(chǎn)品包含3種多肽和2種低分子量蛋白質(zhì)組成,，分子量范圍為3. 3kD-20. 1kD,。可以用來(lái)判斷SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量,。本品為蛋白質(zhì)和多肽混合物的凍干粉,，每種蛋白含量約為15-22.5μg，配有一支1×上樣緩沖液,。

使用說(shuō)明:

1,、  開(kāi)封后,，溶于150 μL 1×上樣緩沖液，于95℃水浴5分鐘,，可根據(jù)需要進(jìn)行小量分裝,，每管10μL，-20℃貯存,，每次取一管使用,，避免反復(fù)凍融。

2,、  使用前取分裝后的小管室溫融化后,，95℃預(yù)熱5分鐘即可上樣電泳，用考馬斯亮藍(lán)G-250染色后可見(jiàn)5條蛋白帶(見(jiàn)下示意圖) ,。

凝膠的配置方法:

凝膠制備及染色注意事項(xiàng):

1,、  先配制分離膠，聚合后再配制夾層膠,，后配制濃縮膠,，3種膠的制膠體積比為4:1.5:1。電泳時(shí),，30v跑1-2小時(shí)后,，待指示前沿到達(dá)分離膠上沿時(shí)，把電壓調(diào)至100v,，至電泳結(jié)束，整個(gè)電泳過(guò)程大約需要6-8小時(shí),。

1. 由于多肽所含的氨基酸數(shù)目較少,，因此如該多肽含有過(guò)多的極性氨基酸(堿性或酸性)，則會(huì)影響其在SDS-PAGE圖上的條帶遷移率,，即其表觀分子量可能和多肽的氨基酸理論推算分子量有一定距離,。
2. 由于SDS-PAGE的圖譜上，蛋白質(zhì)對(duì)數(shù)分子量和遷移率成正比直線關(guān)系的分子量范圍為15,000-200,000,，因此對(duì)于分子量小于10000的蛋白質(zhì)或多肽的分子量,，只能根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)分子量進(jìn)行估計(jì)，推斷其是否落入預(yù)測(cè)的分子量范圍,。
3. 由于超低分子量多肽（3000及3000以下）,，極易從凝膠上浸出，因此染色及脫色時(shí)間不宜太長(zhǎng),，脫色后凝膠也不宜在水中浸泡保存過(guò)久,，否則條帶會(huì)消失。

5,、  電泳之后可將膠置于固定液中固定20分鐘,，再進(jìn)行染色,，能得到較好的蛋白條帶；如時(shí)間不允許,，也可不進(jìn)行固定直接染色,。如果使用配方7進(jìn)行染色時(shí)效果不好或考慮其毒性，請(qǐng)選擇本公司的考馬斯亮藍(lán)蛋白膠快速染色液(貨號(hào):P1300),，該產(chǎn)品具有染色快,，無(wú)毒，靈敏性高等特點(diǎn),，是常規(guī)染色液的替代品,。

附:小分子蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳試劑配制

1、 49.5% T  3 % C (配制夾層膠和濃縮膠)

丙烯酰胺  48g

甲叉雙丙烯酰胺  1.5g

用ddH₂0溶解后定容至100mL

2,、49. 5 % T  6 % C (配制分離膠)

丙烯酰胺 46. 5g

甲叉雙丙烯酰胺 3. 0g

用ddH₂0溶解后定容至100mL

3,、凝膠緩沖液

Tris堿  182g

ddH₂0   300mL  

用HCl調(diào)節(jié)pH值至8.45

用ddH₂0定容至 500mL

再加入SDS  1.5g

4 、10×陽(yáng)極緩沖液(下槽緩沖液〕

Tris堿 121. 1 g

ddH₂0  400mL

用HCl調(diào)pH值至8.9

用ddH₂0定容至 500mL 

5,、陰極緩沖液(上槽緩沖液)

Tris堿  12 .11g

Tricine  17.92g

SDS  1g

用ddH2O定容至1000mL

此溶液不用調(diào)節(jié)pH值

6,、固定液

0.5% 戊二醛

30% 乙醇

用ddH₂0定容至100mL

7、染色液

50% 甲醇

10% 乙酸

0.2% 考馬斯亮藍(lán)G-250

用ddH₂0定容至500mL

MP1003 超低分子量蛋白質(zhì)Marker(3.3-20.1kDa) 15T