產品特點：

本產品就是根據保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量PCR產品。

原理是由一對引物介導,，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,，經過n個熱循環(huán)擴增，擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0＜E＜1,，擴增效率＝倍,，使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。

運輸：低溫

保存：負20度

有效期：一年

貨期：2-3周

注意事項：

1.基礎程序；

2.擴增溫度和延伸溫度,；

3.反應時間,；

4.循環(huán)次數；

5.PCR反應液的配制,；

6.PCR技術的基本原理,；

7.PCR的反應動力學；

8.PCR擴增產物,；

9.PCR反應體系與反應條件,。

浮萍染料法PCR鑒定試劑盒使用方法：

一、稀釋標準曲線樣品（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）,。由于標準品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。

1. 標記6個離心管，分別為7,，6,，5，4,，3,，2。

2. 用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR模板稀釋液,，用帶芯槍頭,，下同）。

3. 在7號管中加入5μL陽性對照（濃度為1×10E8拷貝/μL,，試劑盒提供),，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的標準曲線樣品,。放冰上待用,。

4. 換槍頭，在6號管中加入5μL 1×10E7拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘,，得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用,。

5. 換槍頭,，在5號管中加入5μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘,，得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品,。放冰上待用。

6. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品,。放冰上待用,。

二,、樣品DNA的制備

7. 用自選方法純化樣品的DNA，本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容,。

8. 如果有N個樣品,，則需要進行N+2個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管,、另一個用作樣品制備陰性對照管,。

三、設置qPCR反應（20μL體系,，在樣品制備室進行）

9. 如果做定量分析并且只做1次重復,，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,，1個用于PCR陰性對照（用水做模板）,，6個用于標準曲線。如果做定性分析,，并且只做1次重復,，則標記N+4個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,，1個用于PCR陰性對照（用水做模板）,，1個用于PCR陽性對照。

注意事項：

①加入試劑的順序應一致,，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作,。

④底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,，有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標板時應充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A,、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器 。

⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存,，以免變質,。

⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄,，不可保存。

⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用,。保質前使用。