巨噬細胞清除ClodronateLiposomes氯膦酸二鈉脂質(zhì)體巨噬細胞清除劑

產(chǎn)品簡介：

清除巨噬細胞(depletion of macrophages)是研究巨噬細胞功能的重要方法,。荷蘭阿姆斯特丹Vrije University 的Nico van Rooijen教授開發(fā)的一款Clodronate Liposomes，可以利用巨噬細胞的內(nèi)吞機制,，將脂質(zhì)體包裹的膜不通透性的氯磷酸(clodronate)帶入細胞內(nèi),，利用“特洛伊木馬機制”從而達到去除巨噬細胞的目的。

作用原理:

兩親性磷脂分子在水中可以形成同心圓形式的磷脂雙分子層球體,，磷脂雙分子層中間通過水相分隔,。溶解在水溶液中的氯磷酸鹽在形成脂質(zhì)體的過程中被包裹進磷脂雙分子層之間的水相中(如圖1)。游離的氯磷酸鹽不能自由的通過脂質(zhì)體的磷脂雙分子層,。隨著脂質(zhì)體被巨噬細胞吞噬,，在巨噬細胞溶酶體磷酸酶的作用下，溶解在脂質(zhì)體水相中的氯磷酸鹽就可以被逐步釋放出來,，并累積在細胞內(nèi),，當其達到一定濃度時，巨噬細胞將會受到不可逆轉(zhuǎn)的損傷,，從而進入凋亡過程,。從死亡的巨噬細胞中釋放出來的氯磷酸鹽在細胞外的半衰期極短(大約15min)，可以通過泌尿系統(tǒng)排除體外,。

CLODRONATE LIPOSOMES

氯膦酸鹽脂質(zhì)體

SKU: C-005

Category: Liposomal formulations

clodronateliposomes脂質(zhì)體C-005構(gòu)成：

氯膦酸鹽脂質(zhì)體：

由同心磷脂雙層構(gòu)成的人造球,，該雙層包裹著含有氯膦酸鹽的PBS（磷酸鹽緩沖液）水溶液。脂質(zhì)體是顆粒,，大小大,。3微米。它們在PBS中形成懸浮液,，在儲存時會沉淀,，在試管或燒瓶的底部形成沉淀,。在對實驗動物給藥之前,，應(yīng)先搖晃懸浮液，以回收均勻的懸浮液,。

對照脂質(zhì)體（PBS）：

對照脂質(zhì)體不含氯膦酸鹽,。它們僅含有PBS，可用于對照實驗,，以查明注射氯膦酸鹽脂質(zhì)體后觀察到的效果是否僅是由于巨噬細胞耗竭所致,。

clodronateliposomes脂質(zhì)體C-005產(chǎn)品描述

磷脂雙層由磷脂酰膽堿和膽固醇組成。將所有脂質(zhì)體制劑懸浮在無菌磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）中：

– 10 mM的Na2HPO4；

– 10毫米NaH2PO4,；

– 140毫米氯化鈉,。

我們所有的脂質(zhì)體均帶負電荷，因此不會一起阻塞,。懸浮液中的脂質(zhì)體沒有大小,，這意味著它也包含越來越大的脂質(zhì)體（大3微米）。平均而言,，脂質(zhì)體的大小為1.7微米,。

氯膦酸鹽脂質(zhì)體：人工制備的脂質(zhì)囊泡的懸浮液，包裹了氯膦酸鹽,。懸浮液中氯膦酸鹽的濃度約為,。5毫克/毫升 氯膦酸鹽以CH2Na2Cl2O6P2·5 H2O的形式封裝在脂質(zhì)體囊泡中。

PBS脂質(zhì)體：人工制備的脂質(zhì)囊泡的懸浮液,，其中包裹了PBS水溶液,。這些不含氯膦酸鹽，可用于對照實驗,。

熒光DiI脂質(zhì)體：人工制備的脂質(zhì)囊泡的懸浮液,，其中包封了PBS水溶液，并用熒光染料DiI標記,。它們不含氯膦酸鹽,，可用于研究通過特定給藥途徑注射的脂質(zhì)體是否能夠到達要研究的巨噬細胞。

儲存和使用說明

到達脂質(zhì)體后,，應(yīng)將其儲存在4 – 8oC（或39 – 47oF）之間,。脂質(zhì)體懸浮液不得冷凍，也不要暴露于高溫下,。這可能會對磷脂雙層造成干擾,，可能導(dǎo)致氯膦酸鹽從脂質(zhì)體中泄漏出來。

給藥前,，首先使脂質(zhì)體達到室溫,，然后輕輕搖動或攪拌懸浮液。一段時間后,，脂質(zhì)體易于沉淀,，導(dǎo)致小瓶中的分布不均勻。當注射花費太多時間時,，脂質(zhì)體甚至可能在注射器中沉淀,。如果使用同一注射器注射多只動物，可能會導(dǎo)致劑量不同,。

不建議稀釋懸浮液,，但如有必要,，請使用PBS或鹽水。

我們建議客戶在發(fā)貨后16周內(nèi)使用脂質(zhì)體制劑,。強烈建議不要在到期日期之后使用,。在此期間之后，污染的風險會增加,，并且可能會發(fā)生輕微的功能喪失,。

作用機理

巨噬細胞在免疫和非免疫防御機制中起重要作用。它們是抵御滲透到脊椎動物體內(nèi)的細菌,，病毒和其他形式的微生物污染的首道防線,。巨噬細胞是大型細胞，幾乎存在于所有身體組織中,，它們可以具有不同的形式和名稱（例如庫普弗細胞,，肺泡巨噬細胞，小膠質(zhì)細胞,，破骨細胞,，紅髓巨噬細胞）。巨噬細胞“清除”,，它們攝入并消化可能是潛在病原體的所有異物,，微生物，癌細胞和細胞碎片,。該過程稱為吞噬作用,。巨噬細胞主要通過可溶性分子如細胞因子和趨化因子的介導(dǎo)來進一步調(diào)節(jié)許多非吞噬細胞的功能。他們參與先天免疫,，

脂質(zhì)體是人工制備的球體,，由同心磷脂雙層組成。當磷脂分散在水中時,，親水性頭部將構(gòu)成脂質(zhì)體的兩個外部部分,，而疏水性脂肪酸基團將構(gòu)成內(nèi)部部分（見圖1）。水室分隔雙層,，親水分子可以溶解在其中,，形成脂質(zhì)體包封的分子。氯膦酸鹽（二氯亞甲基雙膦酸酯或Cl2MBP）是一種親水性分子,，可以封裝在磷脂雙層中,。游離氯膦酸鹽不易穿過細胞膜，并通過腎臟系統(tǒng)從循環(huán)中迅速清除（即數(shù)分鐘內(nèi)）,。但是,，氯膦酸鹽脂質(zhì)體包埋在脂質(zhì)體中時，會被巨噬細胞吞噬,，無法逃脫（見圖2）,。磷脂雙層被溶酶體磷脂酶消化，而氯膦酸鹽未被消化并且保留在巨噬細胞中,。巨噬細胞攝入的磷脂雙層和脂質(zhì)體越多,，在巨噬細胞內(nèi)積累的氯膦酸鹽越多。超過一定的細胞內(nèi)濃度,，氯膦酸鹽將通過啟動程序性細胞死亡（即凋亡）來消除巨噬細胞,。

圖1.氯膦酸鹽脂質(zhì)體的示意圖。囊泡由同心的磷脂雙層構(gòu)成,，被水性隔室隔開,。雙層由親水和疏水基團組成。將氯膦酸鹽（在此以黑色方塊表示）溶解在水溶液中并封裝在脂質(zhì)體內(nèi),。

圖2.巨噬細胞對氯膦酸鹽脂質(zhì)體的攝取和消化示意圖。巨噬細胞通過胞吞作用攝入氯膦酸鹽脂質(zhì)體,，然后與含有磷脂酶的溶酶體（L）融合（箭頭）,。磷脂酶破壞的磷脂雙層越多，在巨噬細胞內(nèi)釋放的氯膦酸鹽（黑色方塊）越多,。巨噬細胞終通過凋亡被殺死,。（N =巨噬細胞核）。

因此,，氯膦酸鹽脂質(zhì)體可用于通過消耗巨噬細胞來研究巨噬細胞功能,。例如，它們可以應(yīng)用于各種自身免疫性疾病,，移植,，神經(jīng)系統(tǒng)疾病和基因治療的模型。氯膦酸鹽脂質(zhì)體只有在可以達到的情況下才能耗盡巨噬細胞,。一些組織可以形成脂質(zhì)體的屏障,。通過選擇氯膦酸鹽脂質(zhì)體的正確給藥途徑，可以耗盡特定的器官或組織的巨噬細胞,。有關(guān)管理協(xié)議的更多信息,，請單擊此處。

PBS脂質(zhì)體主要用于對照實驗,。但是,，這些也可以在某些時間段內(nèi)通過飽和來阻止吞噬作用。因此,，PBS脂質(zhì)體不能代表正常健康的,，未阻斷的，未抑制的和未活化的巨噬細胞的對照實驗,。當比較氯膦酸鹽脂質(zhì)體和PBS脂質(zhì)體的作用時,，其作用因此可能小于預(yù)期,。

有關(guān)更多信息，請參見：

– Van Rooijen,，N.和Sanders,，A.（1994）。脂質(zhì)體介導(dǎo)的巨噬細胞耗竭：作用機理,，脂質(zhì)體制備和應(yīng)用,。免疫學(xué)雜志，174（1-2）,，83-93,。

– Van Rooijen，N.,，Sanders,，A.和van den Berg，TK（1996）,。脂質(zhì)體介導(dǎo)的氯膦酸鹽和丙am的細胞內(nèi)遞送誘導(dǎo)的巨噬細胞凋亡,。免疫學(xué)雜志，193（1）,，93-99,。

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