免疫熒光細胞化學病理實驗介紹

免疫熒光細胞化學是根據(jù)抗原抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光素制成熒光標記物,，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應抗原（或抗體）,。在細胞或組織中形成的抗原抗體復合物上含有熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標本,，熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光（黃綠色或桔紅色）,，可以看見熒光所在的細胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質(zhì),、定位,，以及利用定量技術測定含量。

實驗原理及流程

將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上,，與其相應的抗原（或抗體）結合后,，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應。

實驗流程

免疫熒光單標記方法

免疫熒光單標記是指只標記一種蛋白質(zhì)分子,，方法比較簡單,，只要按照染色步驟去做，通常不存在太多的問題,。但要注意固定液的選擇,，固定液選擇的合適與否,，可能會直接影響染色結果。

免疫熒光雙標記方法

免疫熒光的雙標記是指同時標記細胞內(nèi)兩種蛋白質(zhì)分子,，當懷疑某種配體與已知受體結合后可用此方法加以證明,。此方法稍微復雜一些，應注意所用的一抗是來自不同種屬動物的兩種特異性抗體(例如：A抗體為多克隆抗體,，來自家兔,；B抗體為單克隆抗體，來自小鼠),。其次,，兩種二抗所帶熒光素的發(fā)射光不應重疊，且盡量遠離,，通?？梢赃x擇FITC和TRITC、Alex488和TRITC,、FITC和Cy5,，或Cy3和Cy5等來組合。通常情況下,，染色時兩種一抗可以同時孵育,，然后可以同時孵育兩種二抗。但當染色結果一種顏色非常弱,，而另一種顏色比較強時,，應考慮先孵育顏色較弱的二抗。其他步驟同免疫熒光單標記,。

客戶提供

細胞株,；細胞爬片；組織切片,，一抗

公司提供免疫熒光細胞化學病理實驗

基本實驗步驟,、藥品、樣品處理,、圖片及圖片分析,；

熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡拍攝。

實驗周期：1-3周