Masson染色病理實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)介紹

Masson染色（麗春紅酸性品紅-苯胺藍(lán)染色）,，是用于檢測動(dòng)物組織中膠原纖維的一種染色方法之一,，能夠?qū)⒛z原纖維染成藍(lán)色，肌纖維,、和紅細(xì)胞呈紅色,，可用于鑒膠原纖維和肌纖維;并顯示各種組織膠原纖維含量及纖維化程度。
實(shí)驗(yàn)原理

1.膠原纖維是人體中的結(jié)締組織的主要成分,，分布在全身的各個(gè)部位,，組成膠原纖維的主要成分是膠原蛋白。新鮮時(shí)呈白色,，故一般稱為白色纖維,。在HE染色中被染為淡紅色。它的性質(zhì)是具有韌性及緊固性,，因此它能夠抵抗的牽拉力而不至于撕裂或拉斷它們常聚集成粗細(xì)不等的束,，呈波浪狀。膠原纖維由許多根纖細(xì)的膠原纖維組成,。在電鏡下膠原原纖維又由更細(xì)的原纖維構(gòu)成,。根據(jù)Kramen和Little所進(jìn)行的電鏡研究證實(shí)，膠原纖維是*的,，具有橫紋的（重復(fù)期為650）原纖維,。當(dāng)有病變時(shí)這些纖維可發(fā)生變形，常出現(xiàn)的就是膠原纖維的壞死,，膠原纖維在稀酸里可發(fā)生膨脹,，變成膠樣物。它們能被酸性染料染成深淺不一的粉紅色,，這些往往跟淀粉樣物難以區(qū)別,。由于它們的屈光率較弱，因而在光學(xué)顯微鏡下,，很難與纖維區(qū)別,。膠原纖維的分子長度約為3000，直徑約為14,，分子量為300000,。

2.膠原纖維的組成：

1) 細(xì)胞內(nèi)合成前膠原蛋白分子，成纖維細(xì)胞攝取合成蛋白質(zhì)所需的氨基酸,，包括脯氨酸、賴氨酸和甘氨酸,。在粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的核糖體上按照特定的膠厚mRNA的堿基序列,，合成前α-多肽鏈。后者邊合成邊進(jìn)入粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中,，并在羥化酶的作用下,，將肽鏈中的脯氨酸和賴氨酸羥化經(jīng)羥化后,，三條前α-多肽鏈互相纏繞成繩索狀的前膠原蛋白分子。溶解狀態(tài)的前膠原蛋白分子,，兩端未纏繞,，呈球狀構(gòu)形，在粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔風(fēng)或轉(zhuǎn)移到高爾基復(fù)合體內(nèi)加入糖基后,，分泌到細(xì)胞外,。

2) 厚膠原蛋白分子的細(xì)胞外聚合。細(xì)胞外的前膠原蛋白分子,，在肽內(nèi)切酶的作用下,，切去分子兩端球狀構(gòu)表部分，形成厚膠原蛋白分子,，粗約1.5nm,，長約300nm，厚膠原蛋白分子平行排列聚合成膠原纖維,。聚合時(shí),，相互平的相鄰分子錯(cuò)開1/4分子長度，同一排的分子,，菌尾相對并保持距離,，聚合成束，于是形成具有64nm周期橫紋的膠原原纖維,。聚合時(shí),，分子內(nèi)，分子間的化學(xué)基因進(jìn)行縮合,，交聯(lián),，增加厚纖維的穩(wěn)固性。若干膠原原纖維經(jīng)糖蛋白粘合成粗細(xì)子等的膠原纖維,。中性自溶型膠原（neutrla-soluble collagen）→醛糖,、縮醛類脂/肉豆蔻酸、類脂→不溶型膠原（insoluble collagen）

3.膠原纖維的顯示：

膠原纖維在HE染色法被染成粉紅色,，除此之外,，它還可以用一些陰離子的染料來進(jìn)行染色，如用淡綠可把它們?nèi)緸榫G色,，用甲苯胺藍(lán)可將其染為藍(lán)色,，在網(wǎng)狀纖維染色中，如不加以處理,，它又可被染為棕黃色,。常用的特殊染色法有Van Gieson.Masson和Mallary等方法。在**細(xì)胞化學(xué)染色中，膠原纖維由于含的負(fù)電荷過多,，常導(dǎo)致某些非特異性的染色,，應(yīng)特別注意。

服務(wù)流程

1.Van Gieson（V.G）染色法

1）試劑的配制：

weigert氏蘇木素

A液： 蘇木素 1g （haematoxylin）+ * 100ml

B液： 30%三氯化鐵 4ml （ferric chloride）+蒸餾水 95ml+鹽酸 1ml

Van Gieson氏液

A液： 酸性品紅 1g（acid fuchsin）+蒸餾水  100ml

B液： 苦wei酸飽和水溶液,，（1.22%）（picric acid）

注意事項(xiàng)

Weigert氏蘇木素臨用前取A液和B液等份混合,，幾個(gè)小時(shí)內(nèi)用完，長不得超過一天,。

蘇木素配后經(jīng)二十多天才能成熟,，提前配制。

該液能抵抗弱酸性染液,，對已著染的細(xì)胞核在酸性染液的作用,，不易被脫去顏色，如果不特別深染,，則無須分化,。

Van Gieson氏液取B液9ml，加入A液1ml,，即可使用,。

2）操作方法：（后面的各種方法，如沒特別說明,，都在室溫下進(jìn)行）

切片脫蠟至水

用Weigert氏蘇木素染20min

水洗,，必要時(shí)可分化

流水沖洗10min

染Van Gieson氏液1min

用95%酒精快速分化

*脫水，二甲苯透明,，封固,。

結(jié)果

膠原纖維：鮮紅色，肌纖維： 黃*色,，紅細(xì)胞： 黃*色,，細(xì)胞核： 藍(lán)黑或灰色。

注意事項(xiàng)

該法染完的切片,，較易褪色如需照相,，應(yīng)盡早完成。

蘇木素染液如為棕色或沉淀,，應(yīng)將其拋棄,。

分化用的酒精，應(yīng)使用95%以上的酒精,，低濃度的酒精褪色能力強(qiáng),，容易將著染的紅色脫去。

切片也可以用天青蘭蘇木素替代Weigert氏蘇木素,，染核效果基本一樣,。

2.Masson氏三色染色法

1）相關(guān)試劑的配制：

天青石藍(lán)液的配制：

天青石藍(lán)（Celestin blue B） 1.25g

硫酸鐵銨（ferric ammonium sulfate）1.25g

蒸餾水 200ml

甘油（glycerin） 30ml

將前兩者溶于蒸餾水中,，然后煮沸,，冷卻后過濾,，再加入甘油和麝香草酚。

Mayer氏蘇木素的配制：

蘇木素 0.1g

蒸餾水 100ml

鉀明礬（Potassium alum） 5g

檸檬酸（Citric acid） 0.1g

水合氯醛（Chloral hydrate）20mg

配制法：

將蘇木素放入蒸餾水中,，用玻棒不停地?cái)嚢柚敝寥芙?，再依次加入鉀明礬，檸檬酸和水合氯醛,，再繼續(xù)攪拌,，后加入碘酸鈉，攪拌均勻,，即可使用,。

麗春紅酸性品紅液的配制

麗春紅（ponceau 2R） 0.7g

酸性品紅（acid fuchsin）0.3g

冰醋酸 1ml

蒸餾水 99ml

2）操作方法

A　切片脫蠟至水，

B　1%高錳酸鉀氧化切片5min,，

C　水洗,，草酸漂白1min，

D　水洗,，蒸餾水洗,，天青石藍(lán)染5min水洗，

E　摔去余液不用水洗,，滴染Mayer氏蘇木素3-5min,，

F　流水沖洗5-10min，

G　麗春紅苦wei酸飽和液染5min,，

H　1%醋酸水溶液洗,，

I　1%磷鉬酸分化切片約5min，

J　蒸餾水洗,，

K　1%淡綠或者甲苯胺藍(lán)滴染30s,，

L　1%醋酸水溶液洗切片，

M　95%酒精分化,，*脫水,，

N　二甲苯透明，中性樹膠封固,。

3）結(jié)果 

膠原纖維呈現(xiàn)綠色或藍(lán)色,，細(xì)胞核呈現(xiàn)灰黑或灰藍(lán)色，肌肉和胞質(zhì)紅細(xì)胞呈現(xiàn)紅色,。

4）注意事項(xiàng)

①　Masson氏染液配完后保存時(shí)間不宜過長,，如有可能，每次染色以染配為佳,，如何可使著色顏色的鮮艷性,。

②　切片在各級酒精中脫水,，時(shí)間不宜過長，否則會(huì)將著染的顏色脫去,。

③　切片保存所著染的顏色顯長為1-2年以后會(huì)隨著時(shí)間的延長而逐漸褪去,，應(yīng)予注意。

④　磷鉬酸和磷鎢酸在染色法中的作用各有不同,，磷鉬酸作用于膠原纖維,，磷鎢酸作用于纖維膠]質(zhì)，肌膠質(zhì),，神經(jīng)膠質(zhì)和上皮纖維等,。上述兩種試劑的使用，可以促進(jìn)組織有選擇的染色,，它們可以減少背景和核的染色,，使背景清晰。

⑤　如有可能,，在組織固定時(shí),，用Zenker氏固定液固定，如此對染色效果將更好,。

實(shí)驗(yàn)周期

本公司常規(guī)實(shí)驗(yàn)周期為15個(gè)工作日,。（不含送貨時(shí)間）

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)

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