產(chǎn)品及特點(diǎn) 2X 探針法qPCR Mix （TaqMan熒光定量PCR試劑盒） 是基于熒光探針檢測的即用型 PCR 試劑盒，可以對靶片段進(jìn)行實(shí)時(shí)定量 PCR 分

析（quantitative PCR,、qPCR）,。產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液組分、熱啟動(dòng) Taq DNA 聚合

酶,、Taq DNA 穩(wěn)定劑,、dNTPs、MgCl2和穩(wěn)定劑等所有實(shí)時(shí)定量 PCR 所需要的成分,，用戶

只需加入基因組 DNA 或 cDNA 模板,、引物和探針即可進(jìn)行探針法實(shí)時(shí)定量 PCR 反應(yīng)，具有

廣泛的用途,。2X 探針法qPCR Mix （TaqMan熒光定量PCR試劑盒） 具有下列特點(diǎn)：

1. 以 2×Mix 提供,，用戶只需準(zhǔn)備模板、引物,、探針和 ROX 染料（取決于 qPCR 儀器）

即可以進(jìn)行探針法實(shí)時(shí)定量 PCR 實(shí)驗(yàn),，非常方便快捷，降低了操作誤差,。

2. 各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化,，反應(yīng)的靈敏度高，特異性強(qiáng),。靈敏度可以

達(dá)到 50 拷貝/反應(yīng)（跟模板質(zhì)量,，引物設(shè)計(jì)等相關(guān)）。

3. 既可用于 TaqMan 探針 qPCR,，也可以是分子信標(biāo)（molecular beacon）探針 qPCR,。

4. 靈敏度和專一性比染料法熒光定量 PCR 更高。

5. 可用于基因表達(dá)分析,、SNP 分析,、拷貝數(shù)分析等實(shí)驗(yàn)。也可以用于定性檢測,。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研,，1mL 足夠 100 次 20uL 體系的探針法 qPCR 反應(yīng)。

規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 塑料袋包裝 十孔盒包裝

2×探針法 qPCR Mix 190303 1 mL（棕色蓋） 1 mL（棕色

蓋）×10

使用手冊 190303sc 1 份 1 份

2X 探針法qPCR Mix （TaqMan熒光定量PCR試劑盒）

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,，-20℃保存, 不凍融時(shí)保存期限為 24 個(gè)月,。如果需要每天使用,，可在 4℃放置三

周。

自備試劑 DNA 模板,、引物,、超純水。

使用方法

1. 如果有 N 個(gè)樣品并且做定量分析,，設(shè)置 N+7 個(gè)反應(yīng),，多出的 7 個(gè)中，6 個(gè)是做標(biāo)

準(zhǔn)曲線的陽性對照,，一個(gè)是陰性對照（NC）,。在 N+7 個(gè) PCR 管中，加入下列成分,。如

果是做定性分析,，則 6 個(gè)做標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品縮減成一個(gè)陽性對照（PC），用戶自己需要

根據(jù)下表進(jìn)行適當(dāng)修改（把 6 個(gè)標(biāo)曲反應(yīng)改成 1 個(gè)陽性對照反應(yīng)）,。

成分 N 個(gè)樣品管

6 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)

曲線管

NC 管

2×探針法 qPCR MagicMix 各 10 uL 各 10 uL 10 uL

自備引物 1（10uM） 各 1 uL 各 1 uL 1 uL

自備引物 2（10uM） 各 1 uL 各 1 uL 1 uL

自備模板 DNA

基因組 DNA 10-100ng 不加 不加

或 cDNA 1-10ng 不加 不加

自備陽性對照模板（6 各梯度） 不加 各 1 uL（各

加 1 個(gè)梯度） 不加

陰性對照模板（一般用水） 不加 不加 1 uL

自備探針（0.5uM） 各 1 uL 各 1 uL 1 uL

自備 50×自備 ROX I 或 ROX II

染料（見注）

各 0.4 uL 各 0.4 uL 0.4 uL

補(bǔ)超純水到 20 uL 20 uL 20 uL

注,，下列信息僅供參考，具體以 qPCR 儀器的使用手冊為準(zhǔn),。

1,、不需要 ROX 的機(jī)型：Agilent MX3000 和 MX4000、iCycler IQ,、LightCycler 480,、，,、

Smart Cycler System,、Thermal Cycler Dice Real Time System 等型號(hào)的熒光 PCR 儀

器不需要加 ROX 染料，但加入的話也不會(huì)影響整個(gè) PCR 分析,。

2,、需要使用 ROX I 的機(jī)型：ABI Prism7000、7300,、7700,、7900HT、Step One,、

Step One Plus,。

3、需要使用 ROX II 的機(jī)型：ABI Prism7500,、7500 Fast,、MJ Opticon、MJ Chromo4、

Corbett RotorGene 3000,。

2. 放入熒光 PCR 儀中進(jìn)行擴(kuò)增, 下表的擴(kuò)增參數(shù)僅供參考,，一定需要根據(jù)靶分子長度，引

物和探針的 Tm 值,、標(biāo)記染料的種類等進(jìn)行調(diào)節(jié)。一般選擇三步法 PCR：

步驟 反應(yīng)參數(shù) 備注

預(yù)變性 94℃ 2 分鐘

PCR（35-45 次循環(huán)）

94℃ 15 秒

靶分子 長 度在

80-200bp

55-65℃ 15-30 秒

在此步采集熒光信號(hào),，通

道根據(jù)標(biāo)記染料決定

72℃ 30 秒

如果引物 Tm 值接近 60℃,，也可以選擇兩步法 PCR：

步驟 反應(yīng)參數(shù) 備注

預(yù)變性 94℃ 2 分鐘

PCR（35-45 次循環(huán)）

94℃ 15 秒

靶分子 長 度在

80-200bp

60℃ 60 秒

在此步采集熒光信號(hào)，通

道根據(jù)標(biāo)記染料決定

3. 數(shù)據(jù)處理

如果把本試劑盒用于定量檢測,，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,，以 Ct 值為縱軸，繪

制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,，再推

算出其濃度。

如果把本試劑盒用于定性檢測,，只判斷陽性或陰性,。一般情況下，陰性對照 Ct 大于或

等于 40,。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,，有典型擴(kuò)增曲線，Ct 值應(yīng)該小于或等于 30,。

對待測樣品,，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽性,。如果

在 35-40 之間,，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,，如果小

于 40,，則為陽性。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 染料法 qPCR MagicMix