Collagen I detection system kit (Rabbit)

產品貨號：IHC0578

產品規(guī)格：50-100T

產品描述：我公司免疫組化（IHC）試劑盒套裝為免疫組化檢測提供一站式解決方案,，方便快捷,。可用于檢測以兔單克隆或多克隆抗體為一抗的免疫組化實驗,?？乖c一抗形成抗原抗體復合物，生物素化二抗特異性結合上述復合物,，經辣根酶標記的鏈酶卵白素特異性識別生物素,，最后經辣根酶底物顯色即可檢測相應抗原。

保存條件及有效期：一抗體-20℃保存,，避免反復凍融,，一年有效；其他試劑2-8℃避光封閉保存一個月,。

本試劑盒適用于人,、大、小鼠等組織,，產品規(guī)格及組成：

樣本要求：新鮮活檢樣本組織,，中性福爾馬林或多聚甲醛，固定時間 12-48h,，參照病理技術規(guī)范要求取材,、脫水、石蠟包埋并制成蠟塊,，蠟塊在常溫條件下保存有效期有 5 年,。組織切片厚度為 3-5μm 并黏

附在防脫玻片上，輕拍切片架并用吸水紙吸干組織切片中的水滴,，再放入 56-60℃恒溫箱中烘烤 2h 后,，從恒溫箱中移出玻片放在溫室下冷卻,。如果切片在室溫下（15-28℃）保存，為了良好的重現組織中的抗原分

布情況,，請于切片制作后 7 天內完成檢測,。

實驗操作步驟（以石蠟切片為例）

儀器、設備：

移液槍,、免疫組化筆,、水浴鍋、計時器,、孵育濕盒,、切片架、蓋玻片,、光學顯微鏡,、洗瓶等。

操作步驟

• 脫蠟水化,。將石蠟切片置于新鮮二甲苯脫中浸泡 15 分鐘，重復三次,。去除多余的液體后,，依次置于無水乙醇、95%乙醇,、90%乙醇,、80%乙醇、70%乙醇,，各浸泡 5 分鐘,，蒸餾水（或自來水）沖洗 5 分鐘。用 PBS 緩沖液（試劑 1,，將干粉溶解于 1L 去離子水中）沖洗切片 5 分鐘,，重復三次。

2. 抗原修復,。將脫蠟水化后的組織切片置于燒杯（或修復盒）中的耐高溫塑料切片架上,，加適量修復液 1× 檸檬酸鈉抗原修復液（試劑 2，將 100×檸檬酸鈉抗原修復液加去離子水稀釋成 1×檸檬酸鈉抗原修復液）,，液面要浸過切片組織一定高度,，將修復盒置于沸水中煮沸修復 15 分鐘后取出玻片，自然涼至室溫,。用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘,，重復三次。

注意：抗原修復時,，修復液務必保證切片始終浸泡在液體內,，一般情況：修復液的量約為 800mL/1 架,。3.阻斷內源性過氧化物酶。用吸水紙擦干玻片,，免疫組化筆在組織周圍畫圈,，滴加 50μL 內源性過氧化物酶阻斷劑（試劑 3）到切片組織上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育 30 分鐘,，用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘,，重復三次。

• 血清封閉,。用吸水紙擦干玻片,，滴加 50μL 正常山羊血清工作液（試劑 5），37℃封閉 20 分鐘,，以減少非

特異性染色,。

5. 一抗孵育。用抗體稀釋液（試劑 4）將一抗原液稀釋成工作液,，用吸水紙擦干玻片組織周圍的液體,，滴加適量抗體工作液，置于濕盒 4℃孵育過夜或 37℃孵育 1h-2h,。

6. 復溫,。4℃過夜后從冰箱拿出樣本，在室溫下孵育 15min 復溫（抗體孵育為 4℃過夜選用此步驟,，如室溫孵育直接進入下一步清洗）,。用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘，重復三次,。

7. 二抗孵育,。吸水紙擦干切片后滴加 50μL 生物素標記的羊抗兔 IgG（試劑 6），37℃孵育 20  分鐘,，用 PBS

緩沖液沖洗切片 5 分鐘,，重復三次。

• 三抗孵育,。吸水紙擦干切片后滴加 50μL 辣根酶標記的鏈酶卵白素孵育（試劑 7）,，37℃孵育 20  分鐘，用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘,，重復三次,。
• 顯色。甩去 PBS 緩沖液,，吸水紙擦干切片,； 每張切片滴加新鮮配制的 DAB 工作液 50μL（試劑 8：試劑 9：試劑 1=1:1:18  比例配置），孵育 3-5min，光學顯微鏡下觀察染色結果,，切勿顯色過深,；顯色后用自來水沖洗切片終止顯色。

10. 復染,。滴加適量蘇木素染液（試劑 10）復染,，孵育 1-5 分鐘，自來水沖洗 5 分鐘,，滴加鹽酸酒精分化