TF-1 人紅白血病細(xì)胞/STR鑒定介紹

該細(xì)胞系1987年由Kitamura T等建立,，源于一名35歲日本男性的肝素化骨髓抽取樣本，該患者具有嚴(yán)重的全血細(xì)胞減少癥,。細(xì)胞生長(zhǎng)*依賴于IL-3或GM-CSF,，對(duì)IL-5無(wú)反應(yīng)。多種淋巴因子和細(xì)胞因子對(duì)該細(xì)胞都有作用,，如：IL-1,、IL-4、IL-6,、IL-9,、IL-11、IL-13,、CSF,、LIF、NGF,。該細(xì)胞不表達(dá)血型糖蛋白A和碳酸酐酶I,。由該細(xì)胞的形態(tài)和細(xì)胞化學(xué)特征及珠蛋白基因的組成性表達(dá)，顯示該細(xì)胞屬于紅系,。氯高鐵血紅素和δ氨基乙酰丙酸誘導(dǎo)細(xì)胞合成血紅蛋白,，TPA刺激細(xì)胞向巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞分化。

細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：白血病細(xì)胞

2） 形態(tài)：淋巴母細(xì)胞,，懸浮生長(zhǎng),，生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)有細(xì)胞附在培養(yǎng)瓶壁上

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式

（1）干冰運(yùn)輸,，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；

（2）存活細(xì)胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng),，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存,。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系,。

細(xì)胞用途：僅供科研使用。

TF-1 人紅白血病細(xì)胞/STR鑒定接收后的處理：

1） 收到細(xì)胞后,，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們,。

2） 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行,，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度,。看細(xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20×物鏡下,，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照,，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù),。

3） 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,。

4） 貼壁細(xì)胞：在運(yùn)輸過(guò)程中貼壁細(xì)胞會(huì)有脫落的現(xiàn)象,，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長(zhǎng)，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到加有按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。

5） 懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）。

6）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,。  收到細(xì)胞后di一次傳代建議1：2傳代 。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1) 準(zhǔn)備RPMI-1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%，添加2 ng/ml GM-CSF,；雙抗,，1%。該細(xì)胞懸浮生長(zhǎng),，生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)有細(xì)胞附在培養(yǎng)瓶壁上的現(xiàn)象,。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3）凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：傳代低密度不少于2xE4/ml,；細(xì)胞密度保持在3xE4—5xE5/ml；生長(zhǎng)密度zui高不超過(guò)7xE5/ml,。

對(duì)于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3） 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘,，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走）,，加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中,，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存,。

下面T25瓶為例,；

1，細(xì)胞凍存時(shí),，取上清,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2,，4min ，1000rpm 離心去掉上清,。加1ml血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻,，DMSO終濃度為10%,，細(xì)胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,，注意凍存管做好標(biāo)識(shí),。

3，將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱,，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)：

一,、原代細(xì)胞服務(wù)
       各類模式哺乳動(dòng)物的多種原代細(xì)胞資源；
       多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源,；
       原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑,、kit、培養(yǎng)基添加劑等,；
       原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)和整體實(shí)驗(yàn)外包服務(wù),；

二、細(xì)胞株/系服務(wù)
       細(xì)胞株/系培養(yǎng),、增殖,、凍存和相關(guān)說(shuō)明書；
       細(xì)胞系培養(yǎng)過(guò)程的技術(shù)指導(dǎo),；
       細(xì)胞系培養(yǎng)基,、添加劑、血清及相關(guān)生長(zhǎng)因子,、試劑等,；

三、iPS細(xì)胞
       iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無(wú)滋養(yǎng)層在）,；
       iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存,；
       iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí),；
       新藥及實(shí)驗(yàn)儀器上市前評(píng)估；

四,、技術(shù)外包服務(wù)：各類細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn),、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、顯微鏡拍照服務(wù)等

五,、其他：根據(jù)客戶需要定制服務(wù)等