兔外周血巨噬細胞接受后處理：

1.收到非紅系有核細胞后,，請檢查是否漏液 ，如果漏液,，請拍照片發(fā)給我們,。
2.請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3.棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,，添加 6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基,。
4.如果細胞密度達80%-90%請及 時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基,。
5.接到細胞次日,，請檢查細胞是 否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,，請及時與我們取得聯(lián)系,。

細胞培養(yǎng)操作：

1.復蘇細胞：將含有細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度,。
2.細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
（1）棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
（2）加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
（3）按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
（4）將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3.細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
（1）細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰1酶，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
（2）4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細胞,，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%,，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,，注意凍 存管做好標識,。
（3）將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱,，2 個小時以后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

兔外周血巨噬細胞培養(yǎng)注意事項：

1. 收到非紅系有核細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時和我們聯(lián)系,。
2. 仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基,、血清比例、所 需細胞因子 等,，確保細胞培養(yǎng)條件*,。若由于培養(yǎng)條件不*而導致細胞出現(xiàn)問 題,，責任由客戶自行承擔,。
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶 壁脫落,，將細胞置于培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均 會貼壁,，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力,，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng),；如果染色結果顯示細胞無活 力,，請拍下 照片及時和我們聯(lián)系,，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。
4. 靜置細胞貼壁后,，請將細胞瓶內的培養(yǎng)基倒出,，留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng)，待ATCC CRL-1711(Sf9)細 胞匯 合度80%左右時正常傳代,。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng),。培養(yǎng)瓶內多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件,。
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài),，便于和技術部溝通交流,。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系,，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決,。
7.該細胞僅供科研使用,。