合肥星肽生物科技有限公司成立于2019年,，注冊(cè)資金100萬元，公司辦公場所坐落合肥光谷生物城,。致力于為行業(yè)內(nèi)的客戶提供技術(shù)開發(fā),、技術(shù)咨詢、技術(shù)轉(zhuǎn)讓等服務(wù),，秉承著“我們用心 客戶省心”的服務(wù)理念打造出一支敢于創(chuàng)新,、敢于挑戰(zhàn)的綜合服務(wù)團(tuán)隊(duì)。

主營業(yè)務(wù)：人高轉(zhuǎn)移細(xì)胞,、細(xì)胞庫,、試劑、抗原,、多肽,、耗材/消耗品、實(shí)驗(yàn)儀器/設(shè)備,、器械等,。

本公司以技術(shù)為主導(dǎo)，產(chǎn)品的質(zhì)量為核心,，服務(wù)體系為保障,，發(fā)揮人才優(yōu)勢，長期致力于打造成*的科研企業(yè)與機(jī)構(gòu),。持續(xù)通過開放的合作態(tài)度,、專業(yè)的服務(wù)機(jī)制、持續(xù)的**理念全力打造企業(yè)的核心競爭力為成為上等的行業(yè)服務(wù)供應(yīng)商銳意進(jìn)取,。

復(fù)蘇操作流程

1. 準(zhǔn)備工作,，開水浴鍋，預(yù)熱試劑,，超凈工作臺(tái)紫外照射 30min,找到對(duì)應(yīng)細(xì)胞在液氮罐中的位置

2. 紫外照射后風(fēng)機(jī)吹 10min 后,，酒精擦拭臺(tái)面,，放入試劑和離心管，取 15ml 離心管,，加入 9ml 培養(yǎng)液

3. 在液氮罐中取出細(xì)胞,，先擰松放液氮，再擰緊,，將凍存管放入 PE 手套中，然后水浴融化后取出,，1-2min

4. 將凍存管噴酒精后放入超凈臺(tái)內(nèi),，擦干管壁，用 1ml 頭將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到已加培養(yǎng)液的離心管中

5. 800-1000rpm 離心 5min,注意配平

6. 將離心好的細(xì)胞棄上清,，加入 5ml *培養(yǎng)基重懸,，用移液管吹打 8-10 次， 避免產(chǎn)生氣泡,，將細(xì)胞懸液接種到 10cm 培養(yǎng)皿中,，補(bǔ)加 5ml 培養(yǎng)液

7. 混勻，十字法或者 8 字法

8. 將混好的細(xì)胞放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

注意事項(xiàng)

1. 上述操作方案的數(shù)據(jù)可作為參考,，實(shí)際操作已實(shí)驗(yàn)室配備的耗材為準(zhǔn)

2. 凍存時(shí)含 10%DMSO,事先加 9ml 培養(yǎng)液是為了稀釋 DMSO,，理論上 1%DMSO對(duì)細(xì)胞性

3. 隔著 PE 手套能有效防止水浴過程中導(dǎo)致污染

4. 重懸的體積只是作為參考，具體的根據(jù)需要可進(jìn)行調(diào)整

5. 由于復(fù)蘇過程中已經(jīng)離心,，第二天可根據(jù)實(shí)際情況選擇換液或者不換液（主要針對(duì)貼壁細(xì)胞）,。

培養(yǎng)操作

1.復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL人高轉(zhuǎn)移細(xì)胞的懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。

2.細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請(qǐng)及 時(shí)和我們聯(lián)系,。
2. 仔細(xì)閱讀說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如細(xì)胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基,、比例、所需細(xì)胞因子等,，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問 題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān),。
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量 從瓶壁脫落,，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時(shí),再取出觀察,。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán) 染色測定細(xì)胞活力,，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常,， 請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活 力,，請(qǐng)拍下 照片及時(shí)和我們聯(lián)系,，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。
4.靜置細(xì)胞貼壁后,，請(qǐng)將細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出,，留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng)，待細(xì) 胞匯 合度80%左右時(shí)正常傳代,。
5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng),。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞傳代時(shí)可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件,。
6.建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通交流,。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決,。