細胞簡介：

兔臍靜脈內(nèi)皮細胞分離自臍帶組織,；它是臍靜脈的重要結(jié)構(gòu)組成細胞之— ,，在機體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用。臍帶是哺乳類的連接胎兒胎盤的管狀結(jié)構(gòu),，臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈,， 卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈。在子宮中,，子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管,，與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近，在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和02, 代謝產(chǎn)物即代謝廢物和宮養(yǎng)物質(zhì)的交換,。臍動脈將胎兒產(chǎn)生的廢物運送至胎盤,，臍靜脈將02和營養(yǎng)物質(zhì)從胎盤運送給胎兒。

 兔臍靜脈內(nèi)皮細胞接受后處理

1) 收到非紅系有核細胞后,，請檢查是否漏液 ,，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們,。
2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態(tài),，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,，添加 6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基,。
4) 如果細胞密度達80%-90%請及 時進行細胞傳代,，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5) 接到細胞次日,，請檢查細胞是 否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系,。

兔臍靜脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)操作

1）復(fù)蘇細胞：將含有細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。 
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。 
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%,，細胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

兔臍靜脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)注意事項

1. 收到非紅系有核細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時和我們聯(lián)系。
2. 仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關(guān)信息,，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基,、血清比例,、所 需細胞因子 等,，確保細胞培養(yǎng)條件*,。若由于培養(yǎng)條件不*而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問 題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān),。
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶 壁脫落,，將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察,。此時多數(shù)細胞均 會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力,，如果證實細胞活力正常,， 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細胞無活 力,，請拍下 照片及時和我們聯(lián)系,，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。
4. 靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出,，留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng),，待ATCC CRL-1711(Sf9)細 胞匯 合度  80%左右時正常傳代。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng),。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,，細胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件,。
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài)，便于和 技術(shù) 部 溝通交流,。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián) 系,，告知細胞的具體情況,，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7.該細胞僅供科研使用,。