LUDLU-1人肺癌鱗癌細(xì)胞

規(guī)格：25cm2培養(yǎng)瓶一瓶
特點：細(xì)胞代數(shù)為2-3代 
包裝：內(nèi)層無菌自封袋,；防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋,；說明書 
細(xì)胞來源：ATCC,、DSMZ、ECACC以及少數(shù)國內(nèi)外大學(xué)建系,。 
貨期：1-2周 
運輸方式：快遞運輸 

售后：收到人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系,；LS123后7天，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問題（如污染,，死亡,，快遞運輸?shù)仍颍r，應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報告并及時傳真或E-mail致銷售人員,，我們將盡快為您解決,。 

二、無菌操作基本技術(shù) 
1. 實驗進(jìn)行前，無菌室及無菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌,，以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面,，并開啟無菌操作臺風(fēng)扇運轉(zhuǎn)10 分鐘后，才開始實驗操作,。每次操作只處理一株細(xì)胞株,，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染,。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺,，以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面,。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10 分鐘以上后，再進(jìn)行下一個細(xì)胞株之操作,。
2. 無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,，必要物品，例如試管架,、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置,，其它實驗用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通,。實驗用品以70 % ethanol 擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi),。實驗操作應(yīng)在抬面之中央無菌區(qū)域，勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作,。
3. 小心取用無菌之實驗物品,，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,，亦不要在打開之容器正上方操作實驗,。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身,，傾斜約45° 角取用,，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
4. 工作人員應(yīng)注意自身之安全,，須穿戴實驗衣及手套后才進(jìn)行實驗,。對于來自人類或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃壷疅o菌操作臺(至少Class II),。操作過程中,，應(yīng)避免引起aerosol 之產(chǎn)生，小心毒性藥品,，例如DMSO 及TPA 等,，并避免尖銳針頭之傷害等。
5. 定期檢測下列項目：
5.1. CO2 鋼瓶之CO2 壓力 
5.2. CO2 培養(yǎng)箱之CO2 濃度、溫度,、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,，每周更換)。
5.3. 無菌操作臺內(nèi)之a(chǎn)irflow 壓力,，定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜,，預(yù)濾網(wǎng)(300小時/預(yù)濾網(wǎng)，3000 小時/HEPA),。
6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750),，定期更換水槽的水

1、請問工作濃度的胰酶是不是應(yīng)保存在－20度,？如果放在4度冰箱可以保存多久呢,？是不是幾個小時就會失去活性？
平時放在-20度,，分裝在50毫升螺口管,，用時拿一管放4度用。

2. 粉末培養(yǎng)基配制好后(加了血清),，一般在4度盡量不要超過1個月,，如在-20度存放時間可長一些，但*好也不要超過3-4個月,，可能對于永生化細(xì)胞株來說要求不是太高,，但我在過去的4年里一直是做原代細(xì)胞培養(yǎng)的，細(xì)胞嬌弱,，經(jīng)驗表明放置時間不宜過長,。
認(rèn)真按照操作規(guī)程進(jìn)行實驗，一般不大會導(dǎo)致污染,，很多情況下是由于所用的試劑或培養(yǎng)基有污染而使實驗失敗,，
 
3. 關(guān)于實驗用品的清洗與消毒，我的經(jīng)驗是：用過的玻璃器皿先在清水中浸泡30min以上,，然后加少許清洗劑,，以超聲波洗滌30min左右，(如無超聲波洗滌器可用軟毛刷輕輕刷洗干凈),，撈出晾干,，再在鉻酸洗液中浸泡6-18h(或過夜)后，自來水清洗10-15遍,，雙蒸水清洗3-4遍,，晾干，高壓消毒后即可使用,。
許多塑料制品也可以高壓消毒,，例如培養(yǎng)瓶蓋,，膠塞，吸頭等,。不能用于高壓的一般均已制成一次性作用的商品了,，當(dāng)然如果money有限，如進(jìn)口的培養(yǎng)板,、皿等,，也可以重復(fù)使用1-2次，我當(dāng)時使用方法是將其*清潔后,，使用前在紫外燈下敞開照射1-1.5h即可,，我做過多次，沒有出現(xiàn)問題,。塑料培養(yǎng)瓶由于清洗消毒不便,，*好不要重復(fù)使用，如一定要重復(fù)用,，可用環(huán)氧乙烷等消毒，(消毒后一定要放置半年以上方可使用)

在光鏡下,，上皮細(xì)胞通常呈“鋪路石”樣排布,，細(xì)胞之間有拉絲現(xiàn)象（即距離較遠(yuǎn)的細(xì)胞可以通過細(xì)長的觸手相連），細(xì)胞有成片生長的特性,。而間質(zhì)細(xì)胞通常呈梭形,，沒有有成片生長的特性，細(xì)胞之間的聯(lián)系不緊密,。但是細(xì)胞的形態(tài)特征會因為生長條件的改變而改變,，如HeLa細(xì)胞是上皮細(xì)胞，但是在酸性培養(yǎng)條件下會變?yōu)樗笮?。上皮?xì)胞之間都有特征性的緊密連接（橋粒）結(jié)構(gòu),，因此可以通過觀察培養(yǎng)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)來判斷細(xì)胞的類型，如果有緊密連接,，就必然是上皮細(xì)胞,。這是一錘定音的證據(jù)。注意不要把細(xì)胞消化下來做電鏡,，要用細(xì)胞刮刮下來后做電鏡,。此外每一種上皮細(xì)胞都有其特征的細(xì)胞角蛋白的表達(dá)（cytokertin, CK）,可以查一下子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞表達(dá)的CK分子，然后進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)的鑒定,。
在偏堿的情況下培養(yǎng),，耐受能力會逐漸下降，可能是產(chǎn)生脫壁現(xiàn)象的原因,，后來我重新測了一下培養(yǎng)基,，為7.5左右,，我用滅菌的HCL調(diào)了一下，培養(yǎng)基顏色變成淡紅透亮,，再次培養(yǎng),，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞貼壁比較好了，搏動效果也不錯,，因此,，我以后每次培養(yǎng)前都要重新調(diào)好PH值，我覺得很多因素是能影響PH值的
血清質(zhì)量不好,，影響了細(xì)胞生長,。所以，我認(rèn)為以后養(yǎng)細(xì)胞,，用的血清濃度*好是每批次血清都摸一下,，不一定要以參考文獻(xiàn)為準(zhǔn)，畢竟國產(chǎn)的血清質(zhì)量差異比較大啊,。
人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系,；LS123細(xì)胞無菌操作是關(guān)鍵，對于配制培養(yǎng)液時,，有些人為了讓培養(yǎng)粉充分溶解,，攪拌4小時或更長時間。其實這*沒有必要,，一般培養(yǎng)基的固體組分還是易溶于水的,，攪拌的時間長了會增加污染機會，雖然后來濾過除菌了,，但細(xì)菌的代謝產(chǎn)物比如脂多糖誰能夠把它濾掉,？細(xì)菌的代謝是很快的，甚至在常溫下20min就可以繁殖一代,，太可怕了,。我的經(jīng)驗就是攪拌30min-60min就把它過濾。
另外關(guān)于培養(yǎng)基的pH問題,，一般按照說明書操作,，加入所說的NaHCO3量，與預(yù)計的pH不會有什么距離,，也就是說基本上不用調(diào)pH,，如果相差大，要考慮三蒸水的質(zhì)量是否有所下降,，當(dāng)然這時調(diào)pH也是不得已而為之,。我配培養(yǎng)基時基本上不調(diào)pH，只是用試紙檢測一下pH,，觀察一下培養(yǎng)基的顏色,。

（1）東西一定要用自己的,。既不要借別人的，也不要借給別人,?？赡艽蠹矣X得比較自私。實際上還是很有好處的,。并不是每個人的操作都規(guī)范,，因此相互之間串著用，很容易造成交叉污染,。
（2）我習(xí)慣口對口倒液體,，在倒前倒后都要在酒精燈上過一下。自己認(rèn)為比起用吸管吸更能很好的防止污染,。步驟越簡單,，越能防止污染。而且還能節(jié)省很多吸管,。
（3）一次將所有的所需要試劑,、工具放入工作臺。不要做到半路,，又出工作間拿東西,，這樣增加了污染的機會。
（4）整個操作要快,、動作要輕,、而且不要干其他的事情,。比如手機響了,，*好不要接。我一般操作的時候?qū)⑹謾C關(guān)了,，手機聲音響起,，好煩躁。
（5）我一般開紫外線照射臺的時候,，就將培養(yǎng)基,、酶、DHANKS液那到室外讓它自然升溫,。這樣40分鐘后,，溫度也升上來了。有很多人將他放到37度水浴鍋里加熱,。一定要注意水浴鍋的衛(wèi)生,，有的常年不清洗，里面很臟,，容易在外面瓶身上吸附大量細(xì)菌,。因此用它的也一定要勤換水,。從水域鍋那出后，*好找個毛巾插干上面的水,。
（6）操作前要洗手,，用75%酒精搽手。用完操作臺,，要打掃衛(wèi)生,。
人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系；LS123細(xì)胞要經(jīng)常凍存,，我一般只要細(xì)胞狀態(tài)好就將細(xì)胞凍存起來,。細(xì)胞狀態(tài)差了，扔掉,，重新復(fù)蘇,。這是一個必須養(yǎng)成的習(xí)慣。畢竟很多情況下,，細(xì)胞并不是因為污染了,，才讓你感到頭痛。這樣你不會擔(dān)心沒有種子了,。我一般是不加雙抗的,，只要注意，不會污染,。
LUDLU-1人肺癌鱗癌細(xì)胞
過濾時不要用槍吹細(xì)胞!! 如果用力吹,篩網(wǎng)就像刀片一樣,把你的細(xì)胞全部切碎!!

刷玻璃器皿的過程：初洗,、泡酸（一天）、自來水沖洗（10遍）,、純化水沖洗（3遍）,、注射用水沖洗（3遍）。感覺過于苛刻,，自來水只沖洗3遍,。被老師發(fā)現(xiàn)后，一陣痛批,，才知道這是極其關(guān)鍵的一步,，殘留的酸可能會抑制細(xì)胞生長，甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡,，痛失辛苦得來的細(xì)胞,，心血付之東流。無知不能無畏,，一定不能大意,。

做好準(zhǔn)備工作。不要急于投身到人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系,；LS123細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)中去,，要先設(shè)定計劃：步驟,，工具，試劑,。特別是將細(xì)胞用于大規(guī)模生產(chǎn)時,，尤其如此。eg.經(jīng)過干熱滅菌的容器一般認(rèn)為可以在一周內(nèi)保持無菌狀態(tài),，如果準(zhǔn)備多了,，用不完的就得重新滅菌，耗費能源,、占用滅菌空間,，不值得；干熱滅菌需要一天的時間,，當(dāng)器皿準(zhǔn)備不足時,，只能干著急，錯過了*佳操作時間,，也許得很久才能將細(xì)胞狀態(tài)再調(diào)整好,。

對于驕氣的細(xì)胞，我一般都是*天處理完后,，加少量培基（夠蓋住瓶底部）,，第二天換液，以免死細(xì)胞和碎片對活的產(chǎn)生不良影響,。

新配的培養(yǎng)基直接用很清亮,，但是在－20度保存一段時間后再溶解就要出現(xiàn)很多雜質(zhì)，用37度水孵育沒有效果,，握在手里不停搖動非常有效,。其實對于操作熟練的人來說，污染并不是我們想像那樣容易出現(xiàn),，園子里很多人都問否污問題,，而培養(yǎng)基的PH值往往被忽略,，而且大多數(shù)人都習(xí)慣于一次配制1升培養(yǎng)基,，分裝成10X100ml，用1瓶,，另外9瓶放在－20度保存,，很容易出現(xiàn)結(jié)晶，鏡下看就是一些桿狀的物資,，有時候晃動培養(yǎng)基,，肉眼就可以看到很多沉淀，這就需要我們在用之前好好搖勻了,。
凍存： 當(dāng)人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系,；LS123細(xì)胞細(xì)胞狀態(tài)好,，或者代數(shù)比較早，一定要大量凍存,，不要吝惜暫時的大批使用血清,，當(dāng)細(xì)胞狀態(tài)不好，長不起來的時候,，馬上取出來復(fù)蘇,，省時省力，不要去嘗試努力恢復(fù)狀態(tài)不好的細(xì)胞,，費時間也費血清,，會令你痛苦不堪。另外凍存的細(xì)胞不要放到一個地方,，－80度,，液氮（甚至不同的液氮罐）都放一點，誰也不敢保證不出意外,，冰箱也可能有化的時候（我們－20度冰箱就化過）,，都放在一塊容易全軍覆沒。 

按照試劑的保存標(biāo)準(zhǔn)保存,，象血清,、胰酶等沒開封的-20℃，開封后-4℃保存一般不超過7天（用完它吧,，不然浪費了）
5,、一定要弄清楚每個組分的作用，特點,，比如NaHCO3容易分解,，因此培養(yǎng)基在過濾除菌時pH會上升，一般是0.1-0.3,，所以在過濾之前,，要把培養(yǎng)基的pH調(diào)低0.1-0.3。如果你不了解NaHCO3容易分解的特點,，就不會做相應(yīng)的處理,，那么培養(yǎng)基不符和要求，細(xì)胞就長不好
臺盼藍(lán)主要用來鑒定原代培養(yǎng)細(xì)胞時,細(xì)胞分離后的存活情況,，用0.4%臺盼藍(lán)直接染色5-10分鐘,，在顯微鏡下觀察即可，活細(xì)胞不被染色,。方便易用,，因此在實驗室中比較常用，尤其在心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)中。