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利用PCR熒光探針法測(cè)非洲豬瘟ASFV的試劑盒

【廣州健侖生物科技有限公司】

非洲豬瘟（African Swine fever,，ASF）是由非洲豬瘟病毒（African Swine fever virus，ASFV）感染家豬和各種野豬（非洲野豬,、歐洲野豬等）引起一種急性,、出血性、烈性傳染病。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為法定報(bào)告動(dòng)物疫病,，該病也是我國(guó)重點(diǎn)防范的一類動(dòng)物疫情,。其特征是發(fā)病過程短，最急性和急性感染死亡率高達(dá)100%,，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱（達(dá)40~42℃）,，心跳加快，呼吸困難,，部分咳嗽，眼,、鼻有漿液性或粘液性膿性分泌物,，皮膚發(fā)紺，淋巴結(jié),、腎,、胃腸粘膜明顯出血，非洲豬瘟臨床癥狀與豬瘟癥狀相似,，只能依靠實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)確診,。 

ASFV病原簡(jiǎn)介：

非洲豬瘟病毒是非洲豬瘟科非洲豬瘟病毒屬的重要成員，病毒有些特性類似虹彩病毒科和痘病毒科,。病毒粒子的直徑為175－215納米,，呈20面體對(duì)稱，有囊膜,?；蚪M為雙股線狀DNA，大小170－190kb,。在豬體內(nèi),，非洲豬瘟病毒可在幾種類型的細(xì)胞漿中，尤其是網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞中復(fù)制,。該病毒可在鈍緣蜱中增殖,，并使其成為主要的傳播媒介。

本病毒能從被感染豬之血液,、組織液,、內(nèi)臟，及其他排泄物中證實(shí)出來(lái),，低溫暗室內(nèi)存在血液中之病毒可生存六年,，室溫中可活數(shù)周，加熱被感染病毒的血液55℃30分鐘或60℃10分鐘,，病毒將被破壞,，許多脂溶劑和消毒劑可以將其破壞。

易感動(dòng)物

豬與野豬對(duì)本病毒都系自然易感性的，各品種及各不同年齡之豬群同樣是易感性,，夢(mèng)特哥馬利氏等（Montgomery）于1921年曾設(shè)法試驗(yàn)白鼠,、天竺鼠、兔,、貓,、犬、山羊,、綿羊,、牛、馬,、鴿等動(dòng)物,，都未被感染成功，但是偉力合（Velho）于1956年報(bào)告,，他曾盲目通過兔子26代后攻毒豬照樣致死,。

ASFV傳播媒介：

非洲和西班牙半島有幾種軟蜱是ASFV的貯藏宿主和媒介。美洲等地分布廣泛的很多其他蜱種也可傳播ASFV,。一般認(rèn)為,，ASFV傳入無(wú)病地區(qū)都與來(lái)自國(guó)際機(jī)場(chǎng)和港口的未經(jīng)煮過的感染豬制品或殘羹喂豬有關(guān)，或由于接觸了感染的家豬的污染物,，胎兒,，糞便，病豬組織,，并喂了污染飼料而發(fā)生,。發(fā)病率和死亡率最高可達(dá)100%。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將其列為法定報(bào)告動(dòng)物疫病,，我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病,。1921年肯尼亞首次報(bào)道發(fā)生非洲豬瘟疫情，該病于上世紀(jì)60年代傳入歐洲,，70年代傳入南美洲,，2007傳入高加索地區(qū)和俄羅斯。2017年以來(lái),，俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)發(fā)生數(shù)起非洲豬瘟疫情,。2018年我國(guó)沈陽(yáng)市沈北新區(qū)沈北街道（新城子）五五社區(qū)發(fā)現(xiàn)*例病毒。   該病現(xiàn)主要在非洲,、中東歐和高加索地區(qū)流行,。病毒在我國(guó)已有出現(xiàn)。健康豬與患病豬或污染物直接接觸是非洲豬瘟最主要的傳播途徑,，豬被帶毒的蜱等媒介昆蟲叮咬也存在感染非洲豬瘟的可能性,。 [50]

2018年之前,，中國(guó)沒有非洲豬瘟。分子流行病學(xué)研究表明：傳入中國(guó)的非洲豬瘟病毒屬基因Ⅱ型,，與格魯吉亞,、俄羅斯、波蘭公布的毒株全基因組序列同源性為99.95%左右,。

“通常非洲豬瘟跨國(guó)境傳入的途徑主要有四類：一是生豬及其產(chǎn)品國(guó)際貿(mào)易和,，二是國(guó)際旅客攜帶的豬肉及其產(chǎn)品，三是國(guó)際運(yùn)輸工具上的餐廚剩余物,，四是野豬遷徙,。”

中國(guó)已查明疫源的68起家豬疫情，傳播途徑主要有三種：一是生豬及其產(chǎn)品跨區(qū)域調(diào)運(yùn),，占全部疫情約19%,；二是餐廚剩余物喂豬，占全部疫情約34%,；三是人員與車輛帶毒傳播，這是當(dāng)前疫情擴(kuò)散的最主要方式,，占全部疫情約46%,。

ASFV發(fā)病機(jī)理：

ASFV可經(jīng)過口和上呼吸道系統(tǒng)進(jìn)入豬體，在鼻咽部或是扁桃體發(fā)生感染,，病毒迅速蔓延到下頜淋巴結(jié),，通過淋巴和血液遍布全身。強(qiáng)毒感染時(shí)細(xì)胞變化很快,，在呈現(xiàn)明顯的刺激反應(yīng)前,，細(xì)胞都已死亡。弱毒感染時(shí),，刺激反應(yīng)很容易觀察到,，細(xì)胞核變大，普遍發(fā)生有絲分裂,。發(fā)病率通常在40%-85%之間,，死亡率因感染的毒株不同而有所差異。高致病性毒株死亡率可高達(dá)90-100%,；中等致病性毒株在成年動(dòng)物的死亡率在20%-40%之間,，在幼年動(dòng)物的死亡率在70%-80%之間；低致病性毒株死亡率在10%-30%之間,。

ASFV實(shí)驗(yàn)室診斷

健侖生物科技設(shè)計(jì)的特異擴(kuò)增引物快速設(shè)計(jì)體系（ASFV）：

該項(xiàng)目在前期篩選20余萬(wàn)條RAA引物的基礎(chǔ)上,，總結(jié)相關(guān)規(guī)律并建立了全新的RAA設(shè)計(jì)方案，并構(gòu)建了RAA引物設(shè)計(jì)模型,。

通過這一模型,，可快速進(jìn)行特異性RAA引物的設(shè)計(jì)，并可以*避免非特異性擴(kuò)增

突出優(yōu)點(diǎn)：

1.解決困擾基因擴(kuò)增行業(yè)多年的污染問題

2.現(xiàn)場(chǎng)：隨時(shí)隨地進(jìn)行基因擴(kuò)增（世界

，突破傳統(tǒng)的檢測(cè)方法）
3.即時(shí)：現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)結(jié)果
4.便攜：?jiǎn)稳瞬僮?，無(wú)需額外設(shè)備,、3分鐘學(xué)會(huì)操作
5.快速：基因擴(kuò)增5-15分鐘，全程30分鐘完成,。（傳統(tǒng)檢測(cè)基因擴(kuò)增時(shí)間：2小時(shí)）

此項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)做過很多次試驗(yàn),，對(duì)非洲豬瘟檢測(cè)有可行性。我們期待可以推薦到農(nóng)業(yè)部做實(shí)驗(yàn),，認(rèn)證一下實(shí)驗(yàn)過程和結(jié)果,。近年來(lái)國(guó)家對(duì)農(nóng)業(yè)政策的注重程度和肉制品民生問題，非洲豬瘟檢測(cè)大力推廣也將會(huì)是勢(shì)在必行,。

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