小鼠結腸平滑肌原代細胞

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

小鼠結腸平滑肌細胞分離自結腸組織；結腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸,，在第3骶椎平面連接直腸,。結腸分升結腸、橫結腸,、降結腸和乙狀結腸4部分,，大部分固定于腹后壁,，結腸的排列酷似英文字母“M”，將小腸包圍在內(nèi),。結腸橫切面由內(nèi)到外依次為：黏膜（上皮層、固有層,、黏膜肌層）,，黏膜下層（疏松結締組織）,，肌層（內(nèi)環(huán)形、外縱行兩層平滑?。?，外膜（纖維膜或漿膜）。結腸平滑肌細胞主要分布于黏膜肌層和肌層的內(nèi)環(huán)形,、外縱行平滑?。唤Y腸運動少而緩慢,，對刺激的反應也較遲緩。結腸平滑肌在食物消化與吸收,、腸道運動和物質分泌,、誘發(fā)全身炎癥反應以及細胞內(nèi)信號轉導途徑等研究中起著重要的作用,。結腸平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展,，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形,、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形、居中,；2周后細胞匯合,，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富,，有分枝狀突起,，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏,；細胞密度低時,，常交織成網(wǎng)狀；密度高時,，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細胞生長較快,，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點,。結腸平滑肌運動活性受到神經(jīng)遞質,、胃腸激素和藥物等因素的調(diào)節(jié)。隨著現(xiàn)代胃腸動力學研究的進展,，對胃腸運動的研究已從器官,、組織水平發(fā)展到細胞、分子水平,，要求在胃腸道單個平滑肌細胞標本上來完成各種電生理,、藥理和分子生物學等實驗。體外培養(yǎng)細胞,，由于影響因素單一,，是研究細胞功能以及相應的細胞信號轉導機制的基礎。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠結腸平滑肌細胞采用蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質量檢測：

公司實驗室分離的小鼠結腸平滑肌細胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁,，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長,。

　　② 消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細胞,，如白血病細胞、淋巴細胞,、骨髓細胞,、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離,，直接培養(yǎng),，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　　④器官培養(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

SW038-C2-tk細胞,，轉染了tk基因的SW038-C2細胞 副溶血性弧菌 人臍靜脈平滑肌細胞RNAHUVSMC miRNA5 μg  試劑耗材  人臍靜脈平滑肌細胞 人胚肺細胞,，NCI-H1563[H1563]細胞 MLTC-1(間質細胞瘤細胞)  CL-0149MCF-7 人原代子宮微血管內(nèi)皮細胞 豬原代胸腺成纖維細胞

GRP94 (gp96 0.5mgGRP94 (gp96) 94kDa 糖調(diào)節(jié)蛋白(抗原)

BLOC1S2 Protein Human 重組人 BLOC1S2 / BLOS2 蛋白 (GST 標簽)

IL1R2重組大鼠 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白 (His 標簽) Protein

PGLYRP1 Protein Mouse 重組小鼠 PGLYRP1 / PGRP-S 蛋白 (His 標簽)

ANP32A重組人 ANP32A / PHAP1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

大鼠谷酰胺(Gln)試劑盒 ，英文名： Gln ELISA Kit

Porcine ierferon alpha (IFN- alpha) ELISA Kit 豬α干擾素(IFN-α)試劑盒

出血性大腸桿菌(EHEC)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMIP-1Alpha/CCL3(HumanMacrophageInflammatoryProtein-1Alpha)ELISAkit人巨噬細胞性蛋白1α

體液科薩基病毒B(CoxsackievirusB)定性試劑盒20次

ELISAKit2,3-DPG犬2,3-二0酸甘油酸

豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(PCV-Ⅱ)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(PCV-Ⅱ)核酸試劑盒   48T

豬乙型腦病毒(JEV)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

豬乙型腦病毒(JEV)核酸試劑盒(-PCR法)   48T

小鼠結腸平滑肌原代細胞小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白2(IGFBP-2)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat monocyte chemotactic protein 3 (MCP-3/CCL7) ELISA Kit 大鼠單核細胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)試劑盒

Humanansferfactor,TFELISAKit 人轉移因子(TF)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor25(OH)D3/25HVD3(Human25-DihydroxyvitaminD3)ELISAKit人25羥基3

飲料果膠化學比色法定量試劑盒20次

MouseL-Phenylalanineammonla-lyase,PALELISAKit小鼠L苯解氨酶(PAL)試劑盒規(guī)格：96T/48T

OPCML重組人 OBCAM / OPCML 蛋白 (His 標簽) Protein

微粒體S轉移酶1(MGST1)重組蛋白 Recombinant Microsomal Glutathione S Transferase 1 (MGST1)

KIRREL重組人 KIRREL1 / NEPH1 蛋白 (His 標簽) Protein

CADM1 Protein Human 重組人 SynCam / CADM1 / TSLC1 / IGSF4 蛋白 (His 標簽)

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Hong Kong/483/97) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標簽)

客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。(該細胞傳代次數(shù)有限約 2 代，建議客戶收到細胞后盡快安排后續(xù)實驗)

1,、取出細胞瓶,，75%酒精消毒后拆下封口膜，放入 37℃,，5%CO2 培養(yǎng)箱中靜置 6-8 小時,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2,、待細胞達到 80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng),。

3、細胞傳代：

1)吸出細胞瓶中的培養(yǎng)基,，用 PBS 清洗細胞一次,。

2)加入 0.125%消化液約 1mL 至培養(yǎng)瓶中，37℃消化 3min 左右,；顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入培養(yǎng)液終止消化,。

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按 1:2 或 1:3 等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至 5mL,，放入 37℃ 5% CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,，每隔 2-3 天更換新鮮的培養(yǎng)基,。