小鼠精原干原代細(xì)胞

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 球形

傳代特性 可傳2-3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

小鼠精原干細(xì)胞分離自睪丸組織；精原干細(xì)胞是位于睪丸生精小管的生精上皮內(nèi)的一群生精干細(xì)胞,，是成體內(nèi)的定向干細(xì)胞,。精原干細(xì)胞的一些優(yōu)勢(shì)使其成為動(dòng)物轉(zhuǎn)基因的理想宿主細(xì)胞。精原干細(xì)胞的生理生化特性及其分裂增殖,、分化等多項(xiàng)生命活動(dòng)的調(diào)節(jié)機(jī)制的深入研究,，精子發(fā)生機(jī)理的進(jìn)一步闡明以及精原干細(xì)胞轉(zhuǎn)染，異體,、異種移植技術(shù)的實(shí)際應(yīng)用,，都迫切需要找到一種可行的方法將其分離純化，以期得到較高產(chǎn)量和純度的有活力的精原細(xì)胞用于體外培養(yǎng),。在哺乳動(dòng)睪丸內(nèi),，精子發(fā)生時(shí)一個(gè)受高度調(diào)控和持續(xù)的過(guò)程，精原干細(xì)胞（SSCs）一方面進(jìn)行自我更新維持干細(xì)胞數(shù)量,，另一方面又不斷執(zhí)行分化成各級(jí)生精細(xì)胞直至后生成精子,。精原干細(xì)胞定居在曲精細(xì)管上皮的基膜處，是哺乳動(dòng)物精子發(fā)生的原始細(xì)胞，也是動(dòng)物體內(nèi)一起能將遺傳信息傳遞的干細(xì)胞,。精原干細(xì)胞體外培養(yǎng)體系的建立,，在生物學(xué)、醫(yī)學(xué),、畜牧業(yè)生產(chǎn)及制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景,。精原干細(xì)胞（SSCs）是生精上皮近基底膜的一群細(xì)胞，具有自我更新能力和多向分化潛能,，是哺乳動(dòng)物體內(nèi)能將遺傳信息傳遞給下一代的成體干細(xì)胞,。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠精原干細(xì)胞采用先機(jī)械吹打、后蛋白酶消化,，結(jié)合Percoll密度梯度離心法制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠精原干細(xì)胞經(jīng)CD44免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁,，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng),。

　　② 消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

　　對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化,，可采用低速離心分離,，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng),。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。

客戶收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。(該細(xì)胞傳代次數(shù)有限約 2 代,，建議客戶收到細(xì)胞后盡快安排后續(xù)實(shí)驗(yàn))

1,、取出細(xì)胞瓶，75%酒精消毒后拆下封口膜,，放入 37℃,，5%CO2 培養(yǎng)箱中靜置 6-8 小時(shí)，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

2,、待細(xì)胞達(dá)到 80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

3,、細(xì)胞傳代：

1)吸出細(xì)胞瓶中的培養(yǎng)基,，用 PBS 清洗細(xì)胞一次。

2)加入 0.125%消化液約 1mL 至培養(yǎng)瓶中,，37℃消化 3min 左右,；顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,，再加入培養(yǎng)液終止消化,。

3)用吸管輕輕吹打混勻，按 1:2 或 1:3 等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至 5mL,，放入 37℃ 5% CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,，每隔 2-3 天更換新鮮的培養(yǎng)基。

SW-13細(xì)胞,，腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞 黑色素瘤,Bowes Melanoma細(xì)胞 人肺癌細(xì)胞  NSC,，大鼠神經(jīng)干細(xì)胞 人腦視神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞，Hs 683細(xì)胞 RF/6A(猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細(xì)胞)  kasumi-1, 人白血病細(xì)胞株 人原代子宮蛻膜基質(zhì)細(xì)胞 人原代頸靜脈球瘤細(xì)胞

ABCD-1/CCL22 嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白22抗原 0.2mgABCD-1/CCL22 嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白22抗原

CD19 Protein Human 重組人 CD19 / Leu-12 蛋白

IFNGR2重組小鼠 IFNGR2 蛋白 Protein

TIMP1 Protein Rat 重組大鼠 TIMP-1 / TIMP1 蛋白

BPIFA2重組人 BPIFA2 / C20orf70 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

大鼠谷酸脫羧酶自身抗體IgM(GAD-Ab-IgM)試劑盒 ,，英文名： GAD-Ab-IgM ELISA Kit

Rabbit ierleukin 9 (IL-9) ELISA Kit 兔子白介素9(IL-9)試劑盒

粘附性大腸桿菌(EAEC)核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?span>) 48T

CLIAKitformIgM(HumanmembraneIgM)ELISAKit人表面膜免疫球蛋白M

體液賴(lysine)含量高效液相色譜法定量試劑盒20次

ELISAKitAE禽腦脊髓

心肌鈣蛋白 (c)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

CXCL8(CXCL-8)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

結(jié)蛋白 (Desmin)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

雌三醇 (E3)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠精原干原代細(xì)胞豬血管生成素1(ANG-1)ELISA 試劑盒

Human myogenin (MYOG) ELISA Kit 人肌細(xì)胞生成素(MYOG)試劑盒

RabbitVascuolarcelladhesionmolecule1,VCAM-1ELISAkit 兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforai-PIVIgM(Humanai-parainfluenzavirusIgMaibody)ELISAKit人抗副流感病毒IgM抗體

血液5’-核苷酸酶(5’-)活性比色法定量試劑盒20次

PorcineImmunoglobulinM,IgMELISAKit豬免疫球蛋白M(IgM)試劑盒

TF重組小鼠 Transferrin / CD176 / Serotransferrin 蛋白  Protein

干擾素誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)關(guān)聯(lián)病毒抑制蛋白(Viperin)重組蛋白 Recombinant Virus Inhibitory Protein (Viperin)

MAPK12重組人 ERK3 / MAPK12 / P38-gamma 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

BLMH Protein Human 重組人 BLMH / BLM hydrolase 蛋白 (His 標(biāo)簽)

FCGR2A Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD32a / FCGR2A 蛋白 (His 標(biāo)簽)