BY-0643 LWNT-3A小鼠皮下結(jié)締組織細胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-0643
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- 更新時間 2025/7/8 15:24:43
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LWNT-3A小鼠皮下結(jié)締組織細胞系
LWNT-3A小鼠皮下結(jié)締組織細胞系源自小鼠背部皮下結(jié)締組織,，因保留成纖維細胞核心特征且增殖穩(wěn)定,，成為結(jié)締組織修復(fù),、纖維化及創(chuàng)傷愈合研究的重要模型。其兼具皮下結(jié)締組織細胞的表型特征與功能活性,，為解析皮膚修復(fù)機制,、纖維化疾病病理過程提供了理想工具。
顯微鏡下,，LWNT-3A 細胞呈典型的成纖維細胞形態(tài),，貼壁生長態(tài)勢穩(wěn)定，宛如鋪展在培養(yǎng)皿上的 “梭形纖維束”,。細胞直徑約 15-20 微米,，胞體細長，兩端有明顯的突起,，突起長度可達胞體直徑的 4-6 倍,；胞質(zhì)內(nèi)可見豐富的肌動蛋白微絲，經(jīng)鬼筆環(huán)肽染色后呈平行排列的紅色纖維,，展現(xiàn)出活躍的收縮能力,；細胞核呈長橢圓形，位于細胞中央,，核質(zhì)比約 1:2.2,，染色質(zhì)均勻細膩，核仁清晰（1-2 個）,，增殖狀態(tài)良好,。細胞倍增時間約 28-36 小時，當融合度達到 70%-80% 時需傳代,，傳代時用 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 溶液處理 2-3 分鐘,，按 1:5-1:7 比例接種，連續(xù)培養(yǎng) 40 代仍能保持穩(wěn)定的成纖維細胞表型,。
培養(yǎng) LWNT-3A 細胞需模擬皮下結(jié)締組織微環(huán)境,。基礎(chǔ)培養(yǎng)基選用 DMEM（高糖）,，其高濃度葡萄糖可滿足細胞旺盛的能量需求,；添加 10% 胎牛血清提供生長因子,，其中轉(zhuǎn)化生長因子 -β1（TGF-β1）前體對維持細胞的膠原蛋白合成能力至關(guān)重要,。培養(yǎng)環(huán)境需控制在 37℃、5% CO?,，pH 值穩(wěn)定在 7.2-7.4,，通過培養(yǎng)基中的酚紅指示劑監(jiān)測酸堿變化。與真皮成纖維細胞相比,，該細胞對機械刺激更敏感,，在柔性培養(yǎng)皿中培養(yǎng)可使 Ⅰ 型膠原蛋白表達量提高 25%,，更接近體內(nèi)皮下組織的機械應(yīng)力環(huán)境。
在結(jié)締組織修復(fù)機制研究中,，LWNT-3A 細胞系是解析創(chuàng)傷愈合過程的核心模型,。其在劃傷模型中展現(xiàn)出典型的遷移 - 增殖 - 基質(zhì)合成動態(tài)：劃傷后 6 小時細胞開始向創(chuàng)面遷移，12 小時出現(xiàn)增殖高峰,，24 小時啟動膠原蛋白分泌,，48 小時創(chuàng)面覆蓋率可達 60%，wan美模擬皮下組織的自然修復(fù)進程,。實驗顯示,，該過程依賴血小板衍生生長因子（PDGF）的調(diào)控：PDGF-BB 處理可使細胞遷移速度提高 30%，增殖率增加 25%,，Ⅰ 型膠原蛋白 mRNA 表達量上調(diào) 2 倍,；而 PDGF 受體抑制劑處理則會顯著延緩修復(fù)進程，證實其在創(chuàng)傷愈合中的驅(qū)動作用,。此外,，細胞分泌的基質(zhì)金屬蛋白酶 - 2（MMP-2）可降解 provisional 基質(zhì)，為細胞遷移開辟路徑,，敲除 MMP-2 后創(chuàng)面愈合率下降 40%,，揭示修復(fù)過程中基質(zhì)重塑的關(guān)鍵作用。
在纖維化研究中,，LWNT-3A 細胞系能模擬病理性瘢痕形成的分子機制,。在 TGF-β1 持續(xù)刺激下，細胞發(fā)生表型轉(zhuǎn)化 ——α- 平滑肌肌動蛋白（α-SMA）表達量上調(diào) 5 倍,，從梭形變?yōu)樾菭?，收縮能力增強 3 倍，呈現(xiàn)肌成纖維細胞特征,，這與增生性瘢痕中肌成纖維細胞的活化特征高度一致,。同時，細胞的膠原蛋白合成與降解平衡被打破：Ⅰ 型膠原蛋白分泌量增加 4 倍,，而 MMP-1 表達量下降 60%,，導(dǎo)致基質(zhì)過度沉積。研究發(fā)現(xiàn),，TGF-β1 通過激活 Smad3 信號通路誘發(fā)上述變化,，使用 Smad3 抑制劑可使 α-SMA 表達量下降 70%，膠原蛋白沉積減少 55%,，為瘢痕疙瘩的靶向治療提供了實驗依據(jù),。此外，該細胞系可與巨噬細胞共培養(yǎng)構(gòu)建 “炎癥 - 纖維化” 模型，巨噬細胞分泌的 IL-1β 可增強 TGF-β1 的誘導(dǎo)效應(yīng),，使肌成纖維細胞轉(zhuǎn)化率提高 35%,，揭示炎癥微環(huán)境對纖維化的促進作用。
在藥物篩選領(lǐng)域,，LWNT-3A 細胞系是評估抗纖維化,、促修復(fù)藥物的理想模型。其對經(jīng)典抗瘢痕藥物的響應(yīng)與臨床特征一致,，例如,，積雪草苷處理可使 TGF-β1 誘導(dǎo)的 α-SMA 表達量下降 60%，膠原蛋白合成減少 45%,，通過 Western blot 可量化分析藥物活性,。在促修復(fù)藥物篩選中，該細胞系能反映藥物的多靶點作用,，如重組人表pi生長因子（rhEGF）不僅加速細胞遷移（創(chuàng)面愈合率提高 30%）,，還可上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）分泌（增加 2 倍），促進創(chuàng)面血管新生,，體現(xiàn)協(xié)同修復(fù)效應(yīng),。此外，該細胞系可用于評估天然產(chǎn)物的修復(fù)活性,，如黃芪甲苷處理可使細胞的抗氧化酶 GSH-Px 活性提高 40%,，減少氧化應(yīng)激對修復(fù)細胞的損傷，同時促進基質(zhì)合成,，展現(xiàn)多維度保護作用,。
在材料相容性研究中，LWNT-3A 細胞系可評估醫(yī)用植入材料的皮下組織反應(yīng),。將細胞與可降解縫合線共培養(yǎng),，通過檢測細胞黏附率、增殖活性及炎癥因子分泌量,，評估材料的生物相容性 —— 優(yōu)質(zhì)縫合線可使細胞黏附率達 85% 以上,，IL-6 分泌量增加不超過 15%，而劣質(zhì)材料會導(dǎo)致細胞凋亡率上升 30%,，炎癥反應(yīng)加劇,。實驗證實，聚乳酸 - 羥基乙酸共聚物（PLGA）表面修飾 RGD 肽后,，細胞鋪展面積增加 40%,，膠原蛋白分泌量提高 20%，顯著改善材料的組織整合能力,，為醫(yī)用材料的表面優(yōu)化提供了量化標準,。
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