金屬螯合高流速瓊脂糖微球（Chelating Bio-sep 6FF）

                    產(chǎn)品說(shuō)明書

金屬螯合高流速瓊脂糖微球（Chelating Bio-sep 6FF）是將次氨基三乙酸基鍵合在6FF高流速瓊脂糖微球上,，再螯合金屬離子Zn⁺²或Ni⁺²形成的一種親和層析介質(zhì),。廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的制備,。

1.外觀：本品為白色球狀凝膠,無(wú)嗅,、無(wú)味、無(wú)肉眼可見(jiàn)雜質(zhì),。

2.理化指標(biāo)

3．包裝：產(chǎn)品以聚胺酯瓶密封包裝,，外貼標(biāo)簽,，注明“品名、體積,、顆粒大小,、保質(zhì)期、批號(hào),、生產(chǎn)日期,、生產(chǎn)單位及地址” 等內(nèi)容。所選用的包裝應(yīng)有利于保證產(chǎn)品質(zhì)量,、方便運(yùn)輸和貯存,。

4. 運(yùn)輸：運(yùn)輸中應(yīng)避免日曬、雨淋,、重壓,，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn),。

5. 貯存：產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~30℃（保存溶液為20% 乙醇）,，通風(fēng)、干燥,、清潔的地方,。不能冷凍。用過(guò)的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）,。

6.保質(zhì)期：5年,。

7.應(yīng)用：螯合瓊脂糖微球是一種親和層析介質(zhì)，利用樣品中組分中的組氨酸等氨基酸殘基與金屬離子的親和吸附進(jìn)行分離,。用于生物大分子的純化分離,。

下面簡(jiǎn)要介紹介質(zhì)的使用過(guò)程。

7.1 裝柱

⑴讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫,。配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液,。

 ⑵根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠,，清洗掉20%乙醇，抽干,，用緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿,。勻漿作脫氣處理。

⑶將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜）,，務(wù)必使底端無(wú)氣泡,。

⑷  用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡,。打開(kāi)柱子出液口,，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭,。

⑸ 打開(kāi)蠕動(dòng)泵,，讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過(guò)，使柱床穩(wěn)定,。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子,。

7.2螯合金屬離子

本介質(zhì)可以根據(jù)需要，螯合不同的金屬離子,，如Zn⁺²,、Ni⁺²或Cu⁺²等。Cu⁺²與蛋白質(zhì)結(jié)合較強(qiáng),，某些蛋白質(zhì)只與Cu⁺²結(jié)合,；Zn⁺²與蛋白質(zhì)結(jié)合較弱，可進(jìn)行選擇性洗脫,，得到目標(biāo)產(chǎn)品,；Ni⁺²可選擇性地與帶組氨酸的蛋白質(zhì)結(jié)合。（用戶可自行螯合,，也可選擇購(gòu)買螯合了離子的介質(zhì)）

在pH值偏酸性的條件下,，讓過(guò)量含金屬離子的可溶性鹽溶液緩慢地流過(guò)柱子，金屬離子即被螯合在柱子上,。

7.2平衡：讓平衡緩沖液以一定流速流過(guò)柱子,，到流出液電導(dǎo)和pH不變。

7.3上樣

⑴樣品用平衡液配制,，常用NaOAC 或PBS緩沖液,，pH5.5~8.5。渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣,。

⑵一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上,，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。

⑶介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的性質(zhì),、金屬離子種類和流動(dòng)相的性質(zhì),。

7.4洗脫

洗脫一般有兩種方式：一是減小pH值，大多數(shù)蛋白質(zhì)在pH 6到4的范圍內(nèi)可被洗下來(lái),；二是用一種競(jìng)爭(zhēng)試劑,，將蛋白質(zhì)從柱子上置換下來(lái)，如用咪唑,、組氨酸或氯化銨。用競(jìng)爭(zhēng)試劑咪唑或減小pH值的洗脫洗下蛋白質(zhì),，金屬離子仍然在柱子上,；若用競(jìng)爭(zhēng)試劑組氨酸或氯化銨洗脫洗下蛋白質(zhì)，會(huì)將金屬離子和蛋白質(zhì)的復(fù)合物一起洗下來(lái),。

洗脫常用增加競(jìng)爭(zhēng)試劑或減小pH的分段洗脫或梯度洗脫,。如0.05mol/L的PBS中含0.01~0.5mol/L的咪唑，做分段洗脫,。

7.5再生

若金屬離子未流失,，再生后接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用,。若金屬離子已流失或?yàn)榱吮ｋU(xiǎn)起見(jiàn),，要重新做螯合金屬離子的7.2操作。若要換掉金屬離子,，可用EDTA溶液除去現(xiàn)在螯合的金屬離子,，再做新離子的7.2操作。

若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉,，可用在位清洗（CIP）除去,。

7.6 在位清洗

⑴ 對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除,。

⑵ 對(duì)沉淀蛋白,、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂蛋白類，可用1M NaOH 去除,。

⑶ 對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白,、脂蛋白類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗,，但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,，否則容易產(chǎn)生氣泡。

清洗完畢后,，用至少3倍緩沖液平衡柱子,。

7.7注意：在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候,，要避免柱子流干,，氣泡進(jìn)入,。

7.8消毒：用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子,。

7.9滅菌：置介質(zhì)于高壓滅菌鍋中120℃下20分鐘,。