ELISA診斷試劑盒

規(guī)格：48T/96T

樣本：體液,，血清，血漿，細胞培養(yǎng)上清液,，尿液,，組織勻漿,心房水標本等
所需樣本體積： 50-100ul
反應時間： 1-5h
檢測波長： 450 nm
檢測方法：酶聯(lián)免疫法/酶免法（ELISA）
用途： For research use only. Not for diagnostic use.（只能用于科研，不可用于臨床診斷）

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ELISA診斷試劑盒

一、雙抗體夾心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml,。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,，4℃ 。次日,，棄去孔內溶液,，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌,，下同）,。

2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時,。然后洗滌,。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）,。

3. 加酶標抗體：于各反應孔中,，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時,，洗滌,。

4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘,。

5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml,。

6. 結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深,，陽性程度越強,，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”,、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上,，于450nm（若以ABTS顯色,，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性。

二,、間接法

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml,，每孔加0.1ml，4℃,；

2.次日洗滌3次,；

3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；

4.（同時做空白,、陰性及陽性孔對照）于反應孔中,，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分鐘,，洗滌,；

6.zui后一遍用DDW洗滌,。

其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5,、6,。

血清：全血標本于室溫放置2小時或4℃后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測,，收集血液的試管應為一次性的無熱原,，無內毒素試管。血漿：抗凝劑*使用EDTA,，標本采集后30分鐘內于1000×g離心15分鐘,，取上清即可檢測。避免使用溶血,，高血脂標本。其它生物標本：1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測標本應清澈透明,，懸浮物應離心去除。標本收集后若不及時檢測,，請按一次使用量分裝,，凍存于-20℃/-80℃電冰箱內，避免反復凍融,，6個月內進行檢測,4℃保存的應在1周內進行檢測,。 如果樣本中檢測物濃度高于標準品zui高值，請根據(jù)實際情況,，做適當倍數(shù)稀釋(建議先做預實驗,，以確定稀釋倍數(shù))。
酶標儀(450nm波長濾光片)高精度移液器,，EP管及一次性吸頭：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL,200-1000μL37℃恒溫箱, 雙蒸水或去離子水,。

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