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ELISA診斷試劑盒

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ELISA診斷試劑盒

規(guī)格:48T/96T

樣本:體液,,血清,血漿,細胞培養(yǎng)上清液,,尿液,,組織勻漿,心房水標本等
所需樣本體積: 50-100ul
反應時間: 1-5h
檢測波長: 450 nm
檢測方法:酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA
用途: For research use only. Not for diagnostic use.(只能用于科研,不可用于臨床診斷)

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ELISA診斷試劑盒

一、雙抗體夾心法

1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml,。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,,4℃ 。次日,,棄去孔內溶液,,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,,下同),。

2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時,。然后洗滌,。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔),。

3. 加酶標抗體:于各反應孔中,,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,,洗滌,。

4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘,。

5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml,。

6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,,陽性程度越強,,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,,以“+”,、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,,即為陽性。

二,、間接法

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,,每孔加0.1ml,4℃,;

2.次日洗滌3次,;

3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;

4.(同時做空白,、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml;

5.37℃孵育35-60分鐘,,洗滌,;

6.zui后一遍用DDW洗滌,。

其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5,、6,。

血清:全血標本于室溫放置2小時或4℃后于1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,,收集血液的試管應為一次性的無熱原,,無內毒素試管。血漿:抗凝劑*使用EDTA,,標本采集后30分鐘內于1000×g離心15分鐘,,取上清即可檢測。避免使用溶血,,高血脂標本。其它生物標本:1000×g離心20分鐘,,取上清即可檢測標本應清澈透明,,懸浮物應離心去除。標本收集后若不及時檢測,,請按一次使用量分裝,,凍存于-20℃/-80℃電冰箱內,避免反復凍融,,6個月內進行檢測,4℃保存的應在1周內進行檢測,。 如果樣本中檢測物濃度高于標準品zui高值,請根據(jù)實際情況,,做適當倍數(shù)稀釋(建議先做預實驗,,以確定稀釋倍數(shù))。
酶標儀(450nm波長濾光片)高精度移液器,,EP管及一次性吸頭:0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL,200-1000μL37℃恒溫箱, 雙蒸水或去離子水,。

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