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細菌質體需藉轉形 (transformation) 技術

來源:上海美旋生物科技有限公司   2015年07月03日 09:42  

細菌質體需藉由轉形 (transformation) 的技術,,將的引介入細菌體中,藉由寄主細菌的系統(tǒng)達成復制或進基因表現的目的,。寄主細菌的選擇,,須視質體的種類及實驗的目的而定。本實驗的目的在建構一個表現質體,,使的能在大腸桿菌中大表現 GUS,。蛋白

然而,用大腸桿菌進外源基因的表現時,,常遇到的問題是,,外源基因的產物會對寄主細菌造成傷害;此外,,持續(xù)斷的表現外源基因也會使寄主細菌生長減慢或無法生長。因此,,必須有適當的調控機制控制外源基因的表現,。蛋白 我們所用的載體pQE31 在T5 promoter與外源基因插入地址的間,具有一段lac operon中的lacO序,,可用lac repressor結合其上調控T5 promoter的啟動,,只有在inducer (如IPTG) 加入時,才會啟動轉錄的進,,而lac repressor的源則必須靠寄主提供,。

由于此質體為multiple copies,一般大腸桿菌菌株中l(wèi)ac repressor的含足以有效地進調控,,縱使未加入inducer,,也會有外源蛋白質的表現,萬一外源蛋白質對寄主造成毒害,,使的無法生長,,我們可能表現質體無法選殖到,無法達成我們的實驗目的,。 我們所選用的寄主菌株JM109 所具有的 lacIq,,能夠過表現 (overproduce) lac repressor,因此可較有效地控制T5 promoter的啟動,。 然而,,是JM109 這一類帶有l(wèi)acIq的菌株發(fā)生問題時,就必須再換其它的寄主菌株,;如M15[pREP4],,此菌株除染色體上的lacI基因外,還帶有能持續(xù)表現lacrepressor的質體,應可解決lac repressor 足的問題,。

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