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產(chǎn)品名稱:Trizol
產(chǎn)品編號:Invitrogen原裝 15596-026
說明:Trizol是一種新型總RNA抽提試劑,,可以直接從細胞或組織中提取總RNA。Trizol含有苯酚,、異硫氰酸胍等物質,,能迅速破碎細胞并抑制細胞釋放出的核酸酶。Trizol在破碎和溶解細胞時能保持RNA的完整性,,因此對純化RNA及標準化RNA的生產(chǎn)十分有用,。
Trizol的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解細胞,,使細胞中的蛋白,,核酸物質解聚得到釋放。苯酚雖可有效地變性蛋白質,,但不能*抑制RNA酶活性,因此Trizol中還加入了8-羥基喹啉,、異硫氰酸胍,、β-巰基乙醇等來抑制內(nèi)源和外源RNase(RNA酶),。
Trizol是從細胞和組織中提取總RNA的即用型試劑,在樣品裂解或勻漿過程中,,Trizol能保持RNA完整性,。加入氯仿后,溶液分為水相和有機相,,RNA在水相中,。取出水相,用異丙醇可沉淀回收RNA,。
0.1%的8-羥基喹啉可以抑制RNase,,與氯仿聯(lián)合使用可增強抑制作用。
異硫氰酸胍屬于解偶劑,,是一類強力的蛋白質變性劑,,可溶解蛋白質并使蛋白質二級結構消失,導致細胞結構降解,,核蛋白迅速與核酸分離,。
β-巰基乙醇的主要作用是破壞RNase蛋白質中的二硫鍵。
Trizol使用方法:
該法從細菌中提取RNA——用勻漿器將組織磨碎,,加入Trizol處理組織,。5分鐘后加入氯仿,以每分鐘12000轉離心5分鐘,,樣品即分成水樣層,、中間層和有機層。
※RNA存在于水樣層中,,收集水樣層后可以通過異丙醇沉淀RNA來還原,。
※在除去水樣層后,中間層中的DNA和蛋白質也能相繼以沉淀的方式還原:乙醇能使中間層的DNA沉淀析出,,在中間層中加入異丙醇能沉淀出蛋白質,。
每100ml Trizol可以抽提100個六孔板中的樣品或100個50-80mg的組織樣品。無論樣品是人,、動物,、植物還是細菌組織,該方法對少量的組織(50-100mg)和細胞(約五百萬個)及大量的組織(≥1g)和細胞(超過一千萬個)均有較好的分離效果,。
每一百萬細胞用Trizol抽提可得5-15微克RNA,,每毫克組織用Trizol抽提可得1-10微克RNA(產(chǎn)量因細胞和組織不同而異)。
Trizol操作上的簡便性允許其同時處理多個樣品,,所有的操作可以在一小時內(nèi)完成,。
Trizol抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白質的污染,故而能夠作RNA 印跡分析,、斑點雜交,、poly(A)+ 選擇,、體外翻譯、RNA酶保護分析和單分子克?。≒CR),。
※如果是用于PCR,當兩條引物位于單一外顯子內(nèi)時,,建議用級聯(lián)擴大的DNase I
※Trizol試劑能促進不同種屬,、不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,,從大鼠肝臟抽提的RNA經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,,可見許多介于7kb和15kb之間的不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢核糖體RNA條帶位于~5 kb (28S)和~2 kb (18S),,低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間 (tRNA,5S),。當抽提的RNA用TE稀釋時,其A260/A280比值≥1.8,。抽提小RNA時宜-70℃沉淀放置一夜,。
Trizol注意事項:
⒈從少量的組織(1—10 mg)或細胞(102—104)中分離RNA 樣品:往組織或細胞中加入800 ml Trizol。待樣品裂解后,,加入氯仿并進行步驟2中的抽提操作,。在用異丙醇沉淀RNA之前,加入5—10μg無RNA酶的脂質體作為水樣層的載體,。為降低其黏度在加入氯仿前用26號注射器抽吸兩次以切斷基因組DNA,。脂質體會留在水樣層中并和RNA共析出。在濃縮到4 mg/ml之前它不會抑制*絲狀體的合成也不會抑制PCR,。
⒉在勻化后和加入氯仿之前,,樣品可以在–60—–70°C保存至少一個月。RNA沉淀(步驟4,,RNA洗脫)溶于75%的乙醇在2—8°C至少可以保存一周,,在–5—–20°C下至少可保存一年。
⒊臺式離心機大能達到2,600×g的離心力,,如果將離心時間延長到30-60分鐘可以滿足步驟2和步驟3中的操作,。
Trizol相關產(chǎn)品:
R1100 Trlquick Resgent總RNA提取試劑 100ml/500ml
R1200 總RNA提取試劑盒 50T/100T
R1030 RNAse A溶液(10mg/ml ) 1ml
R1050 5×RNA Loading Buffer(非變性) 1ml/1ml*5
R1055 2×RNA Loading Buffer(變性) 1ml/1ml*5
R1600 DEPC處理水 100ml/500ml
R2000 RNA病毒基因組提取試劑盒 50T/100T
R8070 剝離硅烷 200ml
RP1100 通用RT-PCR試劑盒(M-MLV) 25T/50T/100T
RP1200 通用RT-PCR試劑盒(AMV) 50T/100T
S1010 10%SDS 100ml/500ml
S1015 20%SDS 100ml/500ml
S1020 SOB液體培養(yǎng)基(干粉) 1L
S1025 SOB固體培養(yǎng)基(干粉) 1L
S1030 20×SSC PH7.0 100ml/500ml
S1035 20×SSC PH5.3 100ml/500ml
S1051 4×SDS-PAGE分離膠緩沖液(PH=8.8) 100/500ml
S1052 4×SDS-PAGE濃縮膠緩沖液(PH=6.8) 100/500ml
S1090 20×SSC PH7.4 100ml/500ml
S1160 20×SSPE PH7.4 100/500
S2100 抗熒光衰減封片劑 5ml/25ml/100ml/500ml
SA1020 核酸助沉劑(Acryl Carrier) 1ml/5*1ml
SM0020 線粒體提取試劑盒 50T/100T
SN0020 細胞核提取試劑盒 50T/100T
SP0100 丙酮酸鈉(Sodium Pyruvate)(100mM) 100ml
SR0020 RNAwait(非凍型組織RNA保存液) 10ml/100ml/500ml
SR0040 固相RNase清除劑 100ml/250ml
SR0060 液相RNase清除劑 1.5ml
SR0080 RNAsaver(RNA*保存液) 1.5ml
SR1110 2×SYBR Green PCR Mastermix 1.25ml(50T)/200T
SR2110 2×Taqman PCR MasterMix 1.25ml(50T)/200T
SR4110 SYBR Green I(PCR級,10000X) 50ul/100ul
SW3010 膜封閉液 100/500ml
SW3015 5%BSA封閉液 10/100/500ml
SW3020 膜再生液 100ml/500ml
SY1020 SYBR Green I(10000×) 50ul/100ul
SY1040 SYBR Green II(10000×) 50ul/100ul
T1010 1.5M Tris-HCL (PH8.8) 100ml/500ml
T1020 1M Tris-HCL (PH6.8) 100ml/500ml
T1050 5×TBE 緩沖液 500ml
T1060 50×TAE 緩沖液 500ml
T1070 5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液 500ml
T1080 20×TBS 500ml
T1081-500 10×TBST 500ml
T1085-500 1×TBST 500ml
T1090 1M Tris-HCL(PH=7.4) 100ml/500ml
T1120 TE緩沖液,,PH=8.0 100ml/500ml
T1130 1M Tris-HCl(PH=7.0) 100ml/500ml
T1140 1M Tris-HCl(PH=7.5) 100ml/500ml
T1150 1M Tris-HCl(PH=8.0) 100ml/500ml
T1160 1M Tris-HCl(PH=9.0) 100ml/500ml
T1300 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)不含酚紅 100ml
T1320 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)含酚紅 100ml
T1350 胰蛋白酶消化液(0.25%)不含酚紅 100ml
T8120 1% TMB 溶液 10ml
X1010 X-gal(20mg/ml) 1ml/5ml
X1020 0.1%胰蛋白酶液消化液 10ml
Z0020 引物合成2-OD bp
Z0005 引物合成5-OD bp
N1010 核酸純化柱(純化) 100套
N1011 核酸純化柱(提取) 100套
N1012 核酸純化柱(RNA) 100套
N1020 核酸純化柱(大柱) 10套
N1030 離心式過濾柱 100套
N1250 NAAS 非必需氨基酸(100×) 100ml
P0012 10×麗春紅 10ml
P0100 PMSF(100mM) 1/1.5/10/100ml
P1010-2 0.01M PBS (干粉) PH7.2-7.4 2L
P1011 酚:氯仿:異戊醇=25:24:1(PH<5.0) 100ml/500ml
P1012 酚:氯仿:異戊醇=25:24:1(PH>7.8) 100ml/500ml
P1013 酚:氯仿=25:24(PH>7.8) 100ml/500ml
P1014 氯仿:異戊醇=24:1 100ml/500ml
P1015 4×蛋白上樣緩沖液(含DTT) 10ml
P1016 4×蛋白上樣緩沖液(含β-巰基乙醇) 10ml
P1017 4×非變性蛋白上樣緩沖液 10ml
P1018 2×蛋白上樣緩沖液(含DTT) 10ml
P1019 2×蛋白上樣緩沖液(含β-巰基乙醇) 10ml
P1020 1×PBS,,PH7.2-7.4,0.01M,,細胞培養(yǎng)級 500ml
P1021 酚:氯仿:異戊醇 125:24:1(PH≥7.8) 100/500
P1022 10×PBS,,PH7.2-7.4,細胞培養(yǎng)級 500ml
P1023 酚:氯仿=25:24(PH<5.0) 100ml/500ml
P1025 酚:氯仿:異戊醇 125:24:1(PH<5.0) 100/500
P1031-500 1×PBST,PH7.2-7.4,,0.01M,,液體 500ml
P1032-500 20×PBS, PH7.2-7.4,,工作濃度0.01M 500ml
P1033-500 10×PBST 500ml
P1110 4%多聚甲醛 100/500ml
P1111 1%多聚甲醛 100/500ml
P1112 8%多聚甲醛 100/500ml
P1120 蛋白酶K溶液(10mg/ml) 1ml/1*5ml
P1200-1 SDS-PAGE凝膠制備試劑盒 25T
P1200-2 SDS-PAGE凝膠制備試劑盒 50T
P1320 Tris-Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒 25T/50T/100T
P1325 2×Tris-Tricine-SDS-PAGE 上樣緩沖液 (含DTT) 5ML/10ML
T1210 10×Tris-tricine-SDS-PAGE電泳緩沖液(陰極-) 100/500ml
T1215 1×Tris-tricine-SDS-PAGE電泳緩沖液(陰極-) 500ml
T1220 10×Tris-tricine-SDS-PAGE電泳緩沖液(陽極+) 100/500ml
T1225 1×Tris-tricine-SDS-PAGE電泳緩沖液(陽極+) 500ml
CK04-500 Cell counting KIT-8 (CCK-8) 日本 500次 原裝 500T
P1116 多聚甲醛-戊二醛固定液(2%/2.5%) 100/500ml
G7210 PAGE凝膠銀染試劑盒 1L
P1300-500 考馬斯亮藍快速染色液 500ml
P1305 考馬斯亮藍染色套裝(染色液+脫色液) 100+500ML
P1400 青鏈霉素混合液(100×) 100ml
P2010 His標簽純化樹脂(Ni-NTA Resin)NiSepharose 6FF鎳-瓊脂糖凝膠 6FF 5ml/10ML
P2020 GST標簽純化樹脂(GST Resin) 5ml/10ML
P2100 10×多聚賴氨酸 10ml
P3100 pET-32a(+) 10ug
P3518 pUC18 20ug
P3519 Puc19 20ug
P3600 PBR322 20ug
PC0001 BSA標準品(5mg/ml) 1ml
PC0010 Bradford蛋白濃度測定試劑盒 2500微孔(250T)
PC0015 5×G250(蛋白定量) 100ml/500ml
PC0020 BCA蛋白濃度測定試劑盒 500微孔(50T)
PC0030 Lowry法蛋白濃度測定試劑盒 1000微孔(100T)
PC1100 Taq DNA Polymerase(含10x PCR buffer,預混氯化鎂) 0.5/1/2.5/5/10kU
PC1120 2×Taq PCR MasterMix (含染料) 1ml/5×1ml
PC1150 2×Taq PCR MasterMix (不含染料) 1ml/5×1ml
PC1200 Taq Plus DNA Polymerase 500U/1000U
PC1220 2×Taq Plus PCR MasterMix (含染料) 1ml/5×1ml
PC1250 2×Taq Plus PCR MasterMix (不含染料) 1ml/5×1ml
PC1300 Pfu DNA Polymerase 500U/1000U/10k
PC1320 2×Pfu PCR MasterMix (含染料) 1ml/5×1ml
PC1350 2×Pfu PCR MasterMix (不含染料) 1ml/5×1ml
PC2100 dNTPs Mix(2.5mM each) 500ul/1ml
PC2200 dNTPs Mix(10mM each) 500ul/1ml
PC2300 4×dNTPs(100mM) 4×100ul/E
PC2300 4×dNTPs(100mM) 4×400ul/E
PC2300 4×dNTPs(100mM) 4×1ml
PC2301 dATP(100mM) 100ul/400ul
PC2302 dTTP(100mM) 100ul/400ul
PC2303 dCTP(100mM) 100ul/400ul
PC2304 dGTP(100mM) 100ul/400ul