資料簡介
以下是關于大鼠白介素5(IL-5)ELISA試劑盒的實驗使用說明,綜合了多個來源的可靠信息:
BS-2970 大鼠白介素5(IL-5)ELISA試劑盒
一,、實驗原理
采用雙抗體夾心法檢測樣本中IL-5含量,。預包被抗大鼠IL-5抗體的微孔板捕獲樣本中的IL-5,再依次加入生物素化檢測抗體和HRP標記的鏈霉親和素,,形成復合物后通過TMB顯色反應定量,。顏色深淺與IL-5濃度成正比,通過標準曲線計算含量?,。
二,、試劑盒組成
核心組分?:預包被酶標板、標準品(凍干粉,,需復溶),、生物素化抗體、HRP酶結合物,、TMB顯色液,、終止液?
輔助溶液?:20×濃縮洗滌液(需1:20稀釋)、樣品稀釋液,、標準品稀釋液?
耗材?:封板膜,、密封袋?
三、樣本處理要求
血清/血漿?:采集后室溫靜置10-20分鐘,,2000-3000g離心20分鐘,,避免溶血或脂血干擾?。
細胞培養(yǎng)上清?:直接離心去除顆粒物,-20℃保存時避免反復凍融?,。
組織勻漿?:PBS沖洗后稱重勻漿,,離心取上清,建議添加蛋白酶抑制劑?,。
四,、標準操作步驟
標準品稀釋?:復溶后梯度稀釋(如2000-31.2 pg/mL),建議設置8個濃度點?,。
加樣與孵育?:
每孔加100μL樣本或標準品,,37℃孵育90分鐘
洗滌5次后加入生物素化抗體(100μL/孔),37℃孵育60分鐘?
顯色與檢測?:
加入TMB底物避光顯色15分鐘,,終止反應后30分鐘內測定450nm吸光度?,。
五、關鍵注意事項
質量控制?:每板需設空白孔和標準曲線,,OD值需扣除空白背景?,。
干擾避免?:避免使用NaN3防腐劑(抑制HRP活性),溶血/高脂樣本需預處理?,。
保存條件?:未使用的板條需密封干燥保存于2-8℃,,標準品復溶后需當日使用?。
六,、性能參數(shù)
檢測范圍?:典型為15.6-1000 pg/mL,,靈敏度可達3.9 pg/mL?。
精密度?:板內/板間變異系數(shù)分別<10%
注:以上資料僅供參考,,不作為實驗依據(jù),,具體請咨詢技術老師或品牌供應商。
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