以下是關于大鼠白介素5(IL-5)ELISA試劑盒的實驗使用說明，綜合了多個來源的可靠信息：

　　BS-2970 大鼠白介素5(IL-5)ELISA試劑盒

　　一,、實驗原理

　　采用雙抗體夾心法檢測樣本中IL-5含量,。預包被抗大鼠IL-5抗體的微孔板捕獲樣本中的IL-5，再依次加入生物素化檢測抗體和HRP標記的鏈霉親和素,，形成復合物后通過TMB顯色反應定量,。顏色深淺與IL-5濃度成正比，通過標準曲線計算含量?,。

　　二,、試劑盒組成

　　核心組分?：預包被酶標板、標準品(凍干粉,，需復溶),、生物素化抗體、HRP酶結合物,、TMB顯色液,、終止液?

　　輔助溶液?：20×濃縮洗滌液(需1:20稀釋)、樣品稀釋液,、標準品稀釋液?

　　耗材?：封板膜,、密封袋?

　　三、樣本處理要求

　　血清/血漿?：采集后室溫靜置10-20分鐘,，2000-3000g離心20分鐘,，避免溶血或脂血干擾?。

　　細胞培養(yǎng)上清?：直接離心去除顆粒物，-20℃保存時避免反復凍融?,。

　　組織勻漿?：PBS沖洗后稱重勻漿,，離心取上清，建議添加蛋白酶抑制劑?,。

　　四,、標準操作步驟

　　標準品稀釋?：復溶后梯度稀釋(如2000-31.2 pg/mL)，建議設置8個濃度點?,。

　　加樣與孵育?：

　　每孔加100μL樣本或標準品,，37℃孵育90分鐘

　　洗滌5次后加入生物素化抗體(100μL/孔)，37℃孵育60分鐘?

　　顯色與檢測?：

　　加入TMB底物避光顯色15分鐘,，終止反應后30分鐘內測定450nm吸光度?,。

　　五、關鍵注意事項

　　質量控制?：每板需設空白孔和標準曲線,，OD值需扣除空白背景?,。

　　干擾避免?：避免使用NaN3防腐劑(抑制HRP活性)，溶血/高脂樣本需預處理?,。

　　保存條件?：未使用的板條需密封干燥保存于2-8℃,，標準品復溶后需當日使用?。

　　六,、性能參數(shù)

　　檢測范圍?：典型為15.6-1000 pg/mL,，靈敏度可達3.9 pg/mL?。

　　精密度?：板內/板間變異系數(shù)分別<10%

　　注：以上資料僅供參考,，不作為實驗依據(jù),，具體請咨詢技術老師或品牌供應商。

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