人HA tag標簽(HA tag)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

　　本試劑盒僅供研究使用,。 貨號：BS1537

　　檢測范圍：

　　96T

　　12pg/ml -420pg/ml

　　使用目的：

　　本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中 HA tag 標簽(HA tag)含量,。

　　實驗原理

　　本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人 HA tag 標簽(HA tag)水平,。用純化的人 HA tag 標簽(HA tag)抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入 HA tag 標簽(HA tag),，再與 HRP 標記的 HA tag 標簽(HA tag)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng) 過洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉 化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的 HA tag 標簽(HA tag)呈正相關,。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，通過標準曲線計算樣品中人 HA tag 標簽(HA tag)濃度,。

　　試劑盒組成

　　標本要求

　　1.標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能 馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

　　2.不能檢測含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。

　　操作步驟

　　1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋,。

　　400pg/ml

　　5 號標準品

　　150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液 200pg/ml

　　4 號標準品

　　150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液 100pg/ml

　　3 號標準品

　　150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液 50pg/ml

　　2 號標準品

　　150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液 25pg/ml

　　1 號標準品

　　150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

　　2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同)、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl， 然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

　　3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。

　　4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去,，如此 重復 5 次,，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl,，空白孔除外,。

　　7. 溫育：操作同 3。

　　8. 洗滌：操作同 5,。

　　9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色

　　10 分鐘.

　　10. 終止：每孔加終止液 50μl,，終止反應(此時藍色立轉黃色)。

　　11. 測定：以空白孔調零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值),。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。

　　操作程序總結：

　　人HA tag標簽(HA tag)酶聯(lián)免疫分析試劑盒計算

　　以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD 值計算出標

　　準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，

　　即為樣品的實際濃度,。

　　注意事項

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 1 小時后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,， 板條應裝入密封袋中保存,。

　　2.濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果,。

　　3.各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間最好 控制在 5 分鐘內,，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

　　4. 請每次測定的同時做標準曲線,，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD 值 大于標準品孔第一孔的 OD 值),，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,，計 算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

　　5. 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

　　6.底物請避光保存。

　　7.嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

　　9.本試劑不同批號組分不得混用,。

　　保存條件及有效期

　　1.試劑盒保存：;2-8℃。

　　2.有效期：6 個月

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