人胎盤生長因子(PLGF)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

　　僅供研究使用,。

　　檢測范圍： 96T3 ng/L -120 ng/L

　　使用目的：本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關液體樣本中胎盤生長因子(PLGF)含量,。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人胎盤生長因子(PLGF)水平。用純化的人胎盤生長因子(PLGF)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入胎盤生長因子(PLGF),，再與HRP標記的胎盤生長因子(PLGF)抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胎盤生長因子(PLGF)呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),，通過標準曲線計算樣品中人胎盤生長因子(PLGF)濃度。

　　試劑盒組成

　　130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液

　　6ml×1瓶2酶標試劑

　　6ml×1瓶8標準品(1600μg/mL)

　　0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液

　　1.5ml×1瓶4樣品稀釋液

　　6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液

　　6ml×1瓶11封板膜2張 6顯色劑B液

　　6ml×1/瓶12密封袋1個

　　標本要求

　　1.標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行,，提取后應盡s快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融

　　2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。

　　操作步驟

　　1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。800μg/mL5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液400μg/mL4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液200μg/mL3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液100μg/mL2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液50μg/mL1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

　　2.加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同),、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

　　3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

　　4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

　　5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復5次,，拍干,。

　　6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。

　　7.溫育：操作同3,。

　　8.洗滌：操作同5。

　　9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

　　10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(此時藍色立轉黃色),。

　　11.測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。

　　操作程序總結：

　　計算 以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度,。

　　人胎盤生長因子(PLGF)酶聯(lián)免疫分析試劑盒 注意事項

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存,。

　　2.濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果,。

　　3.各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

　　4.請每次測定的同時做標準曲線,，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。

　　5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

　　6.底物請避光保存,。

　　7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

　　8.所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

　　9.本試劑不同批號組分不得混用。

　　保存條件及有效期1.試劑盒保存：2-8℃,。2.

　　有效期：6個月