豬乙型腦炎病毒抗體檢測(cè)試 劑盒說(shuō)明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：豬乙型腦炎病毒抗體( IgG )診斷試 劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英 文 名 稱 ： Porcine Japanese B Encephalitis Virus Antibody Test Kit (ELISA), JEV Ab

【規(guī)格】

96 T×2

【預(yù)期用途】

本試劑盒用于定性測(cè)定豬血清中日本乙 型腦炎病毒（又稱流行性乙型腦炎）IgG 抗體,。 用于評(píng)估豬場(chǎng)豬乙型腦炎病毒疫苗免疫狀況， 感染豬的血清學(xué)診斷以及豬乙型腦炎病毒的 流行病學(xué)調(diào)查,。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) ( ELISA )原理,，由包被有高純度的豬乙型腦炎 抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗 豬 IgG 及其它試劑配套組成,。其反應(yīng)機(jī)理為包 被抗原與樣本中的 JEV-IgG 結(jié)合,，再與酶標(biāo) 抗豬 IgG 抗體形成“包被抗原+JEV-IgG+酶標(biāo) 抗豬 IgG 抗體”復(fù)合物，加入顯色劑,，通過(guò)酶 催化反應(yīng)顯色,。顯色深淺與 JEV-IgG 的量成 正比，當(dāng)顯色超過(guò)設(shè)定的臨界值時(shí)結(jié)果判為陽(yáng)

性,，表明免疫有效或有自然感染,。

【主要成份】

1抗原包被板96 T×2

2酶標(biāo)記物22 ml

3樣本稀釋液50 ml

4陰性對(duì)照血清1.5 ml

5陽(yáng)性對(duì)照血清1.5 ml

6顯色劑12 ml×2

7終止液12 ml

810×濃縮洗滌液50 ml

9蓋板膜2 張

10說(shuō)明書1 份

【自備器材】

1 ．酶標(biāo)儀（雙波長(zhǎng) 450/630 nm 濾光片）

2 ．微量移液器（單道 10-100 μl 、0.5-10 μl ,、多 道 30-300 μl）

3 ．水浴箱或恒溫箱

4 ．微量振蕩器

5 ．一次性槍頭（10 μl ,，200 μl）

6 ．去離子水

【樣本要求】

1 ．本試劑檢測(cè)的樣本為豬血清，樣本應(yīng)無(wú)菌采 集,，2 ℃-8 ℃貯存應(yīng)不超過(guò)一周,，長(zhǎng)期應(yīng)在 -20 ℃以下保存。

2 ．避免使用嚴(yán)重溶血,、有沉淀物,、含懸浮纖維 蛋白及污染長(zhǎng)菌的血清樣本。

【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】

1 ．試劑盒組分回溫平衡:  試劑盒組分在實(shí)驗(yàn)前,，

先取出置室溫 30 min ,。酶標(biāo)板應(yīng)在室溫中平 衡至潮氣干盡后方可拆開。

2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將 樣本作 40 倍稀釋（例：將 5 μl 樣本加至 195 μl 樣本稀釋液中）,。

3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液 直接用去離子水稀釋 10 倍（例：將 10 ml 洗滌液加入 90 ml 去離子水中）,。若 10 倍濃 縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶，屬正?，F(xiàn)象,，放置 37 ℃ 至溶解后即可,。

【操作步驟】

1.  加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條,，檢測(cè) 時(shí),，設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照各 2 孔,，分別加入不用 稀釋的陰,、陽(yáng)性對(duì)照血清 100 μl 于相應(yīng)孔中 （可不設(shè)空白對(duì)照）。其余為樣本孔,，每孔加 100 μl 用樣本稀釋液稀釋好的樣本,。

2.  溫育：加樣后，蓋上蓋板膜,，置 37 ℃溫 育 30 min,。

3.  洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿反應(yīng) 板孔,，靜置 10 s ,，直接甩出，洗滌 3 次,，最 后一次洗滌后吸干板內(nèi)液體,。

4.  加酶：每孔加酶標(biāo)記物 100 μl。

5.  溫育：加好酶標(biāo)記物的反應(yīng)板蓋好蓋板 膜,，置 37 ℃溫育 30 min,。

6.  洗板：同步驟 3。

7.  顯色：每孔加顯色劑 100 μl ,，振蕩混勻,， 37 ℃避光反應(yīng) 10 min。

8.  終止：每孔加終止液 50 μl,，振蕩 10 s,，充 分混勻，終止后即讀數(shù),。

9.  讀數(shù)：以 450 nm/ 630 nm 雙波長(zhǎng)檢測(cè)，讀 取各孔吸光度值（OD 值）,。

【結(jié)果判定】

在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔的OD 值,。檢測(cè)結(jié)果有 效的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔的平均 OD 值≥0.60， 陰性對(duì)照孔的平均 OD 值＜0.40,；樣品中抗 體存在與否,，或樣本中抗體的相對(duì)水平的高 低由 S/P 值決定，S/P 值計(jì)算時(shí)按以下方式處

理:

—                       —

S/P=( 樣本 OD450/630 值－NCx )/（PCx -

—                                            —

NC x ) ,，其 中 NC x 表示 陰性對(duì) 照孔平均

OD450/630 值（若小于 0.05,，則按照 0.05 計(jì)算）,，

PC x表示陽(yáng)性對(duì)照孔平均 OD450/630 值；

當(dāng)樣本的 S/P≥0.25 時(shí)判為陽(yáng)性,；樣品 S/P 值＜0.25 時(shí)判為陰性,。

【注意事項(xiàng)】

1.  請(qǐng)?jiān)谑褂迷噭┖兄埃屑?xì)閱讀說(shuō)明書,。

2.  請(qǐng)不要使用過(guò)期的試劑盒組分,，不要將不 同批次的組分混合使用。

3.  本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對(duì)待,，試驗(yàn) 廢棄物應(yīng)經(jīng) 121 ℃高壓蒸汽滅菌 30 min ,，或 用 5.0 g/L 次氯酸鈉等消毒劑處理 30 min 后 廢棄。

4.  未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔 袋并密封 2 ℃-8 ℃保存,。未用完的液體試劑 應(yīng)蓋好瓶蓋,，與其它配套組份放入試劑盒中 于 2 ℃-8 ℃避光保存。

5.  應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑,，并經(jīng)常 校對(duì)其準(zhǔn)確性,。

6.  加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿而不溢，防止孔口有 游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染,。

7.  終止液有腐蝕性,，若濺到皮膚或衣物上應(yīng) 立即用大量清水沖洗干凈。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

于 2 ℃-8 ℃避光保存,，防止冷凍,，有 效期 12 個(gè)月。

【生產(chǎn)日期及批號(hào)】

詳見外包裝盒

從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域,、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤(rùn)色服務(wù),，協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十余年，是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間,、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,，歡迎您與我們聯(lián)系。

實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)：