百歐博偉生物：細(xì)胞實(shí)驗(yàn)是科學(xué)研究中較為常見的實(shí)驗(yàn),，其中原代細(xì)胞以其和反映體內(nèi)生長(zhǎng)特性的特點(diǎn),，在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中被廣泛應(yīng)用。

那么,，什么是原代細(xì)胞,？

原代細(xì)胞是指來源于胚胎、組織器官及外周血,，經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細(xì)胞,。初代培養(yǎng)物次傳代培養(yǎng)后的細(xì)胞，即稱之為細(xì)胞系,。原代細(xì)胞的提取主要包括取材,、分離、培養(yǎng),、純化,，本次將主要介紹原代細(xì)胞的取材與分離。

取材：取材是原代細(xì)胞提取的步,，也是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件,。取材前需要注意組織類型、分化程度,、年齡等,；注意避免機(jī)械損傷,，去除無用組織，同時(shí)避免干燥,，最重要的是要嚴(yán)格控制無菌,。另外，整個(gè)取材過程,，在保證無菌的條件下,，盡量快速完成，以保證樣本的新鮮和細(xì)胞活性,。血液、骨髓,、羊水等取材,，不僅要嚴(yán)格控制無菌，還需要注意抗凝,。

分離：取材完成后,，需要盡快采用適當(dāng)?shù)姆椒▽⒓?xì)胞分離出來。

一,、懸浮細(xì)胞的分離

將取材得到的血液,、羊水、胸水或腹水等進(jìn)行低速離心,，1000r/min,，5-10min；收集細(xì)胞沉淀,，用PBS（不含鈣,、鎂）洗兩次，再用培養(yǎng)基洗一次,，最后用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，調(diào)整細(xì)胞濃度后分瓶培養(yǎng)。若想要提取的細(xì)胞不在沉淀中,，而是在細(xì)胞懸液中,，則需要加入細(xì)胞分層液，經(jīng)離心后,，由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層,，從而分離出細(xì)胞。

二,、實(shí)體組織中細(xì)胞的分離

1,、機(jī)械分散法

首先用剪刀和吸管將組織剪切并吹打分散細(xì)胞，然后將已充分剪碎分散的組織放在注射器內(nèi)使細(xì)胞通過針頭壓出,，最后在不銹鋼網(wǎng)內(nèi)用鈍物擠壓將細(xì)胞從網(wǎng)孔中壓擠出,。

這種分離細(xì)胞的方法簡(jiǎn)便,、快速，適合纖維成分少的軟,，部分胚胎組織等,，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,。

2,、消化分離法

這個(gè)方法就是將組織剪切成小塊，再利用酶（胰蛋白酶和/或膠原酶）的生化作用和/或非酶（EDTA）的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng),，使團(tuán)塊膨松,，由塊狀變成絮狀，再結(jié)合機(jī)械法（用吸管吹打分散或電磁攪拌）使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散,，制成細(xì)胞懸液,。

酶或非酶的選擇需要根據(jù)組織及細(xì)胞的特性進(jìn)行選擇。一般來講,，胰蛋白酶適合用于消化軟組織,，膠原酶適合消化纖維較多的組織，而EDTA則對(duì)上皮組織分散效果較好,。另外,，也可以將EDTA與胰蛋白酶以1:1或1:2的比例混合使用，這樣不僅利于細(xì)胞脫壁又利于細(xì)胞分散,，可降低胰蛋白酶的用量和毒性作用,。

這種方法還需要注意的是，組織塊需要使用PBS（不含鈣,、鎂）漂洗2-3次以去除組織中的鈣,、鎂離子和血清對(duì)胰蛋白酶和EDTA的抑制作用；同時(shí),，胰酶濃度不宜過高,，作用時(shí)間不能太長(zhǎng)，以免過量損傷細(xì)胞,；消化后的組織要盡量輕柔地棄去消化液,。

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