一,、背景

小鼠肺大動脈平滑肌細(xì)胞試劑盒適用于分離培養(yǎng)小鼠肺大動脈平滑肌細(xì)胞,。小鼠肺大動脈平滑肌細(xì)胞試劑盒提供了的組織分離條件,，分離單個細(xì)胞的效率高。此外，小鼠肺大動脈平滑肌細(xì)胞試劑盒還能保證所分離的細(xì)胞在培養(yǎng)基中具有很高的活性,。

二、生理結(jié)構(gòu)

小鼠肺大動脈平滑肌細(xì)胞分離自正常小鼠肺動脈組織,，細(xì)胞呈梭形或多角形。該細(xì)胞所表達(dá)的鈣通道表面表達(dá)的ICAM-1和VCAM-1,，參與血管壁炎癥反應(yīng),。該細(xì)胞也是多數(shù)重要動脈疾病的靶細(xì)胞,。雖然肺大動脈組織機械韌性很強，但利用小鼠肺大動脈平滑肌細(xì)胞試劑盒中提供的肺大動脈組織分離體系來分離,，EDTA/EGTA處理過的薄的肺大動脈組織片能使得肺大動脈組織中成肺大動脈細(xì)胞的一些功能特性發(fā)生改變，從而將成肺大動脈細(xì)胞分離開來,。

平滑肌細(xì)胞是指構(gòu)成平滑肌組織。平滑肌即無紋肌的通稱,，是被視為較橫紋肌原始的一種肌肉。平滑肌除作為無脊椎動物的軀體肌而有廣泛分布外，在脊椎動物除心肌之外而大部分內(nèi)臟肌也是由平滑肌組成的,。

三,、應(yīng)用

用于AS小鼠主動脈平滑肌上TRPC1-BK信號復(fù)合體分子表達(dá)量的變化研究：

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病,、缺血性腦血管病等缺血性心腦血管疾病已成為嚴(yán)重威脅人類健康的流行性非傳染病,而動脈粥樣硬化（atherosclerosis,AS）斑塊的發(fā)生和發(fā)展是其重要的病理生理基礎(chǔ)。AS發(fā)生機制復(fù)雜,在斑塊的形成和發(fā)展過程中,血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）的遷徙,、增殖,、表型轉(zhuǎn)換及細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生起到主要作用。因此,研究VSMCs功能在AS斑塊發(fā)生和發(fā)展中的作用對于防治冠心病具有重要意義,。而VSMCs內(nèi)鈣離子(calcium ion,Ca2+)不僅是VSMCs收縮和舒張的主要調(diào)節(jié)因子,而且作為第二信使對于VSMCs的遷徙、增殖,、表型轉(zhuǎn)換及細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生也起到了關(guān)鍵的作用。

瞬時受體電位通道（Transient receptor potential channel,TRPC）是一類非選擇性的陽離子通道,為細(xì)胞感受器,包括TRPC1,、TRPC2,、TRPC3,、TRPC4、TRPC5,、TRPC6,、TRPC7這七種類型,而這七種TRPC通道中,發(fā)現(xiàn)研究最深入的是TRPC1通道,這種通道在VSMCs上廣泛分布。與經(jīng)典電壓門控性Ca2+通道不同的是TRPC1通道無電壓依賴性,。當(dāng)肌漿網(wǎng)內(nèi)Ca2+耗竭時,TRPC1通道開放,Ca2+內(nèi)流增加,血管收縮,故TRPC1通道功能主要是參與VSMCs收縮和增生、細(xì)胞凋亡及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等,。TRPC1通過調(diào)控Ca2+內(nèi)流影響機體的生理機能。

研究表明,多種病理生理狀態(tài)與TRPC通道表達(dá)量增多和減少,、通道開閉活性異常存在相關(guān)性。使用抑制劑來抑制TRPC通達(dá)蛋白的表達(dá)或使用特異性TRPC通道的阻滯劑可使細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度降低,、血管舒張,目前認(rèn)為,TRPC家族成員是構(gòu)成細(xì)胞膜上鈣池操縱性Ca2+通道和受體操縱性Ca2+通道的分子基礎(chǔ),它作為主要的Ca2+內(nèi)流通道,不僅參與機體許多生理功能,還與多種病理過程相關(guān)。

采用動脈粥樣硬化組和對照組小鼠分別10只,處死后分離得到主動脈血管平滑肌組織,從組織中提取總RNA及總蛋白,使用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（reverse-transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）,、免疫蛋白印記（Western blot）及免疫組化等方法檢測并比較兩組小鼠主動脈血管平滑肌組織中TRPC1,、大電導(dǎo)鈣離子激活鉀通道α亞單位(large conductance Ca2+-activated K+channelαsubunit,BKα)及大電導(dǎo)Ca2+激活鉀通道β1亞單位(large conductance Ca2+-activated K+channelβ1 subunit,BKβ1)亞基m RNA和蛋白表達(dá)量的差異,。

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