細(xì)胞簡介

平臺編號：Bio-129567

規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

細(xì)胞信息：SiMa

細(xì)胞名稱：人腎上腺神經(jīng)母細(xì)胞瘤SiMa

產(chǎn)品規(guī)格：T25培養(yǎng)瓶x1；1.5ml凍存管x2

細(xì)胞數(shù)量：1x10^6,；1x10^6

保存溫度：37℃,；-198℃

運(yùn)輸方式：常溫保溫運(yùn)輸；干冰運(yùn)輸

安全等級：1

用途限制：僅供科研3類

培養(yǎng)體系：DMEM高糖（不含丙酮酸鈉）+10%FBS+1%三抗

培養(yǎng)溫度：37℃

二氧化碳濃度：5%

簡介：人腎上腺神經(jīng)母細(xì)胞瘤SiMa取自男性供體

用途：細(xì)胞系

注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,，非藥用,，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）

細(xì)胞復(fù)蘇操作說明（針對凍存細(xì)胞）

實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺 ，CO2 培養(yǎng)箱 ,，倒置顯微鏡 ,，水浴鍋 ,，離心機(jī)

實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ,，胎牛血清 ，三抗

實(shí)驗(yàn)材料：T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 ,，需復(fù)蘇的細(xì)胞 ,，移液槍 ,，槍頭 ，離心管

實(shí)驗(yàn)步驟：

1,、從液氮罐中取出凍存管 ,，直接浸入 37℃溫水中 ，并不時搖動令其盡快融化,。

2,、從 37℃水浴中取出凍存管 ，打開蓋子 ,，移液槍吸出細(xì)胞懸液 ,，加到離心管并滴加 5 倍以上培養(yǎng)基并混勻 。

3,、操作離心 ,，調(diào)至 1000 轉(zhuǎn)/分 ，時長 10 分鐘

4,、棄去上清液 ,，重懸離心管底部細(xì)胞沉淀 ，在 T25 培養(yǎng)瓶中加入 5-6ml 培養(yǎng)基 ,，計數(shù) ,，調(diào)整細(xì)胞密度，接種培養(yǎng)瓶 ,，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),。

5、次日更換一次培養(yǎng)液,，繼續(xù)培養(yǎng),。

6、注意：凍存細(xì)胞建議三管一起復(fù)蘇到一個 T25 培養(yǎng)瓶中,。

細(xì)胞傳代操作說明（貼壁細(xì)胞）

實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺 ,，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ,，離心機(jī)

實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ,，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ,，三抗

實(shí)驗(yàn)材料：T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 ,，需傳代的細(xì)胞 ，移液槍 ,，槍頭 ,，離心管

實(shí)驗(yàn)步驟：

1、細(xì)胞于培養(yǎng)箱中 ,，愈合度達(dá)到 80% ,，可進(jìn)行傳代,。

2、按 T25 培養(yǎng)瓶計 ,，吸出培養(yǎng)基 ,，并 PBS 緩沖液輕沖 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ,，消 化 2min（具體時間視細(xì)胞而定）,，后用培養(yǎng)基將細(xì)胞沖洗下來。1000r/min 離心 10 min ,，棄上清 收集細(xì)胞,，鋪至 2 個 T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，各添加 7ml 培養(yǎng)基,。

3,、注意：消化時間不易過長，消化前血清成分務(wù)必去除干凈,，終止消化請用新鮮培養(yǎng)基,，原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用（終止消化或傳代）。

細(xì)胞傳代操作說明（懸浮細(xì)胞）

實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺 ,，CO2 培養(yǎng)箱 ,，倒置顯微鏡 ，離心機(jī)

實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ,，胎牛血清 ,，三抗

實(shí)驗(yàn)材料：T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 ，需傳代的細(xì)胞 ,，移液槍 ,，槍頭 ，離心管

實(shí)驗(yàn)步驟：

1,、細(xì)胞于培養(yǎng)箱中,，密度達(dá)到懸浮細(xì)胞傳代標(biāo)準(zhǔn)（沉降后可鋪滿底面），可進(jìn)行傳代,。

2,、按 T25 培養(yǎng)瓶計，吹打均勻,，吸出培養(yǎng)基,，1000r/min 離心 10 min，棄上清收集細(xì)胞,，鋪至 2 個T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，各添加 7ml 培養(yǎng)基。

3、注意：原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用（傳代）,。

細(xì)胞凍存操作說明

實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺 ,，CO2 培養(yǎng)箱 ,，倒置顯微鏡 ,，離心機(jī)

實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ,，0.25%胰酶 ,，三抗 ，DMSO

實(shí)驗(yàn)材料：T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 ,，需凍存的細(xì)胞 ,，移液槍 ，槍頭 ,，離心管 ,，凍存管 ，記號筆

實(shí)驗(yàn)步驟：

1,、取待凍存的細(xì)胞（按 T25 計 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ,，用培養(yǎng)基將細(xì)胞沖洗下來。1000r/min 離心 10min ,，棄上清收集細(xì)胞,。 如果是懸浮生長的細(xì)胞 ，則可直接離心收集細(xì)胞,。

2,、加入 1ml 凍存液(90%FBS+10%DMSO )制成細(xì)胞懸液。

3,、細(xì)胞懸液裝入 3 支凍存管中,。

4、凍存管在 4℃下存放 30 min ,，轉(zhuǎn)放-20℃ 1.5～2 h ,，再轉(zhuǎn)人-70℃ 4-12 h 后即可轉(zhuǎn)移到液氮內(nèi)(- 196℃) ，并登記,。

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