一,、控制菌檢驗(yàn)方法驗(yàn)證

建立藥品的微生物限度檢查時(shí),，進(jìn)行控制菌檢查方法的驗(yàn)證，以確認(rèn)所采用的方法適合于該藥品的的控制菌檢查方法測(cè)定,。若藥品的組分或原檢驗(yàn)條件發(fā)生改變可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí),，檢驗(yàn)方法應(yīng)進(jìn)行重新驗(yàn)證。驗(yàn)證試驗(yàn)也可與供試品的控制菌檢查同時(shí)進(jìn)行,。

1,、驗(yàn)證用菌株

大腸埃希菌（Esherichia coli）【CMCC(B) 44102】或同等有效的

金黃色葡萄球菌（ Staphylococcus）【CMCC(B)26003】或同等有效的

乙型付傷寒沙門菌（Salmonella paratyphi B）【CMCC(B) 50094】或同等有效的

銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）【CMCC (B) 10104】或同等有效的

驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代（從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為0 代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù),，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性,。

2、菌液制備

大腸埃希菌,、金黃色葡萄球菌,、乙型付傷寒沙門菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物至10mL營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,，35～37℃培養(yǎng)18～24小時(shí),；分別取培養(yǎng)液 1mL加0.9%無菌氯化鈉溶液，采用10倍遞增稀釋法,，稀釋至10-5~10-7,，制成每1ml含菌數(shù)10～100CFU的菌懸液,。

3、陰性菌對(duì)照組

設(shè)立陰性菌對(duì)照組是為了驗(yàn)證該控制菌檢查方法的專屬性,。

方法同試驗(yàn)組,，驗(yàn)證大腸埃希菌、大腸菌群,、沙門菌檢查法時(shí)的陰性對(duì)照菌采用金黃色葡萄球菌,；驗(yàn)證銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌,、梭菌檢查法時(shí)的陰性對(duì)照菌采用大腸埃希菌,。陰性對(duì)照菌不得檢出。

4,、試驗(yàn)組

常規(guī)法

大腸埃希菌 取相當(dāng)于1g或1mL供試品的供試液至100mL膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，陽性菌對(duì)照加入大腸埃希菌10～100CFU,，陰性菌對(duì)照加入金黃色葡萄球菌 10～100CFU,，35～37℃培養(yǎng)18～24小時(shí)，取此培養(yǎng)物按《微生物限度檢查SOP》大腸埃希菌項(xiàng)下規(guī)定檢查,。

大腸菌群 取含適量（不少于10ml）的膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基管3支,，分別加入含供試品1g或1mL 、0.1g或0.1mL,、含供試品0.001g或0.001mL的供試液,，陽性菌對(duì)照加入大腸埃希菌10～100CFU，陰性菌對(duì)照加入金黃色葡萄球菌 10～100CFU,，35～37℃培養(yǎng)18～24小時(shí),，按《微生物限度檢查SOP》大腸菌群項(xiàng)下規(guī)定檢查。

沙門菌 取供試品10g或10mL,，直接或處理后接種至適量（不少于200mL）的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,，用勻漿儀或其他適宜方法混勻，陽性菌對(duì)照加入沙門菌 10～100CFU,，陰性菌對(duì)照加入金黃色葡萄球菌10～100CFU,，35～37℃培養(yǎng)18～24小時(shí)。按《微生物限度檢查SOP》沙門菌項(xiàng)下規(guī)定檢查,。

銅綠假單胞菌 取相當(dāng)于1g或1mL供試品的供試液至100mL膽鹽乳糖培養(yǎng)基中,，陽性菌對(duì)照加入銅綠假單胞菌10～100CFU，陰性菌對(duì)照加入大腸埃希菌10～100CFU,，35～37℃培養(yǎng)18～24小時(shí),。按《微生物限度檢查SOP》沙門菌項(xiàng)下規(guī)定檢查。

金黃色葡萄球菌 取相當(dāng)于1g或1mL供試品的供試液至100mL膽鹽乳糖培養(yǎng)基中,，陽性菌對(duì)照加入金黃色葡萄球菌10～100CFU,，陰性菌對(duì)照加入大腸埃希菌 10～100CFU,，35～37℃培養(yǎng)18～24小時(shí)。按《微生物限度檢查SOP》金黃色葡萄球菌項(xiàng)下規(guī)定檢查,。

培養(yǎng)基稀釋法：

供試品有抑菌作用,，放大培養(yǎng)基量，由1：100放大到1：300,、1：500或1：1000,，由于容器體積限制，一般放大到500mL或1000mL,，本法適用于抑菌作用不強(qiáng)的樣品,。

薄膜過濾法：

采用薄膜過濾法時(shí)，取規(guī)定量供試液,，過濾,，沖洗，試驗(yàn)菌應(yīng)加在次沖洗液中,，過濾后,，注入培養(yǎng)基或取出濾膜接入增菌培養(yǎng)基中。

離心沉淀集菌法：

取規(guī)定量供試液,，如供試液含許多藥渣,，先以500轉(zhuǎn)/分鐘離心3~5分鐘，取全部上清液,，再以3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘,，取下面1mL液體，并將適量的稀釋劑洗滌管底的洗滌液一并移入同瓶增菌液中,，培養(yǎng),，本法適用于中度抑菌作用的樣品。

中和法：

在供試品溶液中加入相應(yīng)的中和劑,，以減除供試品中抑菌成分的作用,，中和劑應(yīng)對(duì)微生物無毒性，與抑菌成分結(jié)合后的產(chǎn)物應(yīng)對(duì)微生物亦無毒性,，或有毒性但不影響待檢菌的檢出,。

5、結(jié)果判斷

至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立平行試驗(yàn),。陰性菌對(duì)照組不得檢出陰性對(duì)照菌,。若試驗(yàn)組檢出試驗(yàn)菌，照該供試液制備方法和控制菌檢查法進(jìn)行該供試品控制菌的檢查,；若試驗(yàn)組未檢出試驗(yàn)菌,，應(yīng)采用自然沉降法、培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀集菌法,、薄膜過濾法,、中和法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證,。

北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有Biolog微生物鑒定系統(tǒng),，超低溫冰箱，生物安全柜等儀器設(shè)備可進(jìn)行對(duì)微生物分離,、鑒定等常規(guī)的分子實(shí)驗(yàn)研究,。對(duì)我國生命科學(xué)研究、生物技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需求進(jìn)行積極的面對(duì)社會(huì)乃至國外收集保藏提供微生物菌種資源,。在保證生物安全和保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的前提下,，為工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、衛(wèi)生健康,、環(huán)境保護(hù),、科研教育提供微生物物種資源、基因資源,、信息資源和專業(yè)技術(shù)服務(wù),。

除此之外，我們還擁有對(duì)菌種,、細(xì)胞、培養(yǎng)基,、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù),，對(duì)購買項(xiàng)目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位，都有相關(guān)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得優(yōu)質(zhì)服務(wù),！也正因?yàn)榇?，北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司與國內(nèi)外多家研制單位、生物制藥,、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)和科研院所院校,、化工企業(yè)有著良好、長(zhǎng)期和穩(wěn)定的合作關(guān)系,！