本試劑盒只能用于科學(xué)研究,，不得用于醫(yī)學(xué)診斷

大鼠（Rat）抗丙型肝炎病毒抗體（anti-HCV）

ELISA檢測(cè)試劑盒

使用說明書

檢測(cè)原理

試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被抗丙型肝炎病毒抗原的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本,、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,，經(jīng)過溫育并徹底洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較,，從而判定標(biāo)本中抗丙型肝炎病毒抗體（anti-HCV）的存在與否,。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。

2.  血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清,。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清,。

5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)

1.  試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,，這屬于正常現(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用,。

2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存,。

3.  預(yù)處理后的樣本無需稀釋,，直接取50μL加樣即可。

4.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間,、加液量及順序進(jìn)行溫育操作,。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

試劑的準(zhǔn)備

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,，在吸水紙上拍干，如此洗板5次,。

2.  自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min，洗板5次,。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置陰,、陽性對(duì)照孔和樣本孔,，陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照,、陽性對(duì)照各50μL,；

3.  待測(cè)樣本孔加待測(cè)樣本50μL；

4.  隨后陰,、陽性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。

6.  每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值,。

結(jié)果判斷

 1.  試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00,；

                陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15。

2.  臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off）,，樣品為陰性

4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off）,，樣品為陽性

試劑盒性能

1.  準(zhǔn)確性：陽性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00；陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15,，說明試驗(yàn)結(jié)果有效,。

2.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

3.  重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%,。

4.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存,。

5.  有效期：6個(gè)月

從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤(rùn)色服務(wù),，協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十余年,，是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無法完成您的課題研究,，歡迎您與我們聯(lián)系,。

實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)：