產品概述：

Biozellen細胞3D培養(yǎng)基質膠套裝

Biozellen細胞3D培養(yǎng)基質膠套裝

Catalog No. B-P-00002-2,、B-P-00002-4,、B-P-00002-10

Specification 2ml-kit、4ml-kit ,、10ml-kit

Storage 4℃保存,、 保存兩年

Biozellen®基質膠特點

1、100%植物源材料,，無任何動物成分,；

2、胺基酸序列100%人源化 ,；

3,、可調控基質膠硬度進行多種細胞培養(yǎng)；

4,、3D細胞/類器官培養(yǎng)種類數量范圍更廣,；

5、無人畜共通病原菌或毒素風險,；

6,、為適用于醫(yī)療生物原料；

7,、高活性,、高純度、可融化,；

8,、4度運輸、4度保存,；

9,、2年保存時間；

10,、3D培養(yǎng)結束后基質膠可以溫和融化,，并保留3D細胞/類器官結構完整性；

一,、產品描述

Biozellen®3D細胞培養(yǎng)基質膠套裝包含整套基質膠,、膠體固定液,、膠體溶解液,，可應用到3D細胞培養(yǎng)與微環(huán)境應用等；本試劑盒操作便利且可調控基質膠硬度進行多種細胞培養(yǎng)測試；植物膠體可快速形成水凝膠,， 請操作詳細閱讀此使用指南,。

（Biozellen®3D細胞培養(yǎng)基質膠套裝為植物來源，無動物成分）

二,、應用

•3D細胞球體培養(yǎng)試驗

•小鼠皮下成瘤

•細胞遷移實驗

•適合用于3D細胞藥物篩檢平臺

•細胞生長和分化

•代謝/毒理學研究

三,、樣本類型

•腫瘤細胞系、

四,、試劑盒組分

五,、使用步驟：

A、試劑制備

A基質膠：將A基質膠溶于37℃水浴槽回溫10分鐘,， 確認融解.

C緩沖溶液(1X)制備：使用將10X C緩沖溶液用冰的無細胞培養(yǎng)液(例如： 無血清DMEM,、opt-MEM) 制備成 1X C 緩沖溶液。(不要用 PBS 稀釋 C 緩沖液) .

D 緩沖溶液(1X)制備: 使用用冷的 1x PBS 稀釋 10X D 緩沖溶液至 1X D 緩沖溶液.

B,、Biozellen®3D細胞培養(yǎng)基質膠的制備

全部步驟需要在無菌環(huán)境內操作,，操作步驟如下：

1. 將24孔培養(yǎng)板放置于冰上預冷半小時。

2. 細胞計數后取 2×105~2×107 細胞與 0.5 毫升 37℃ 細胞培養(yǎng)基均勻混合,，并與0.5毫升37℃ A膠按照 1:1 等比例均勻混合,，終細胞密度1*105~1*107cells/mL。

注：請選擇適當的培養(yǎng)溶液與條件進行試驗,。

3.取 20-40 微升步驟 2的混合液滴于 步驟 1 預冷的培養(yǎng)板上,，膠體將于 5 分鐘內成膠。 注: 測試膠體是否成膠,，可用微量吸管尖溫和的觸碰膠體表面進行確認,。

4.待膠體成膠后，添加1毫升冰的1X C緩沖溶液,，并蓋過步驟3 的膠溶液,，固定 15 分鐘。

5.待15分鐘固定后,，小心的吸取 C 緩沖溶液并置換為適合此細胞生長之培養(yǎng)基溶液,。

6將含有細胞的膠于37°C 二氧化碳培養(yǎng)箱內進行7~14天的培養(yǎng)，并觀察細胞球體的形成,，按正常培養(yǎng)基更換頻率進行更換操作,。

C、溶膠與收集細胞球體準備程序

小心的將培養(yǎng)基吸取移除,，并用1X PBS進行清洗,。

小心的將 1X PBS 吸取移除，并添加 1 毫升冰的D緩沖溶液,，蓋過膠滴于室溫反應 5分鐘,。

溫和的用1毫升移液管吸取，直到膠滴溶解。

將含有細胞球體的溶液吸入1.5 毫升離心管,，用1000 rpm的轉速離心10分鐘,，移除上清液體并收集細胞球體做分析。

D,、收集單顆細胞準備程序

在分離單細胞,，先按上述溶膠與收集細胞球體準備程序進行操作

1. 添加trypsin-EDTA并與收集的細胞球體于37°C混合反應。

2. 用1毫升移液管混合,，直到細胞體分解,。

3. 待細胞球體分解，加入3倍體積的1X PBS,，并用1000轉的轉速進行離心10分鐘,，并移除上清液體收集沉淀的單細胞做分析。

E,、細胞遷移實驗準備程序

1. 準備Transwell裝置及無血清DMEM細胞培養(yǎng)液 (用于稀釋A膠),。

2. A膠 (2X) (貨號:B-P-00002-A) 置于37 ℃水浴槽回溫10分鐘，確認融解,。

3. 用無血清DMEM細胞培養(yǎng)液將A膠 (2X)稀釋50倍,。

4. 根據Transwell上室底部面積加入100-120 ul/cm2稀釋后的A 膠稀釋液到Transwell上室中。

5. 將步驟4在4 ℃冰箱孵育30分鐘,。

6. 將多余的稀釋液吸出,，并在Transwell上室中加入無血清的癌細胞系細胞懸浮液使細胞濃度約7.5 x 104 cells/well.。

7. 在Transwell下室中加入含10 %血清的細胞培養(yǎng)液做為chemoattractant,，吸引癌細胞系進行遷移,。

F、小鼠皮下成瘤實驗準備程序

1. 將 A膠 (2X) (貨號:B-P-00002-A) 置于37 ℃水浴槽回溫10分鐘,，確認融解,。

2. 將C緩沖溶液(10X) 貨號:B-P-00002-C)與冰的無血清細胞培養(yǎng)液 (例如: 無血清DMEM或內含VEGF、heparin的無血清DMEM) 按1:4比例均勻混合配置,。(例如:1 ml C緩沖溶液(10X) 與 4 ml 無血清DMEM混合,，不可用PBS稀釋)

3. 將 A膠 (2X) 與約2*106 cells/ml的癌細胞系懸浮液按1:1等比例均勻混合配置，癌細胞系懸浮液終濃度約為106 cells/ml,。

4. 選用21-25 G的針頭 (避免破壞細胞),，抽取0.2-0.3 ml 預冷稀釋后的C緩沖溶液。(C緩沖溶液用于A膠成膠反應)

5. 使用步驟4的同一支針管,，再抽取0.1-0.7 ml含細胞的A膠混合液,，在冰上孵育五分鐘。

6. 以皮下注射方式注射0.3-1.0 ml至小鼠,。(需一次注射完含C緩沖溶液的A膠混合液)

注1: 注射體積可依不同實驗目的做調整,，若為血管生成研究注射體積需至少0.5 ml,。

注2: 此步驟依實驗需求可執(zhí)行或不執(zhí)行，若需呈現明顯的皮下注射隆起效果,，可于注射完畢后,，在小鼠注射部位冰敷5-10分鐘

,，若需呈現明顯的皮下注射隆起效果,，可于注射完畢后，在小鼠注射部位冰敷5-10分鐘,。

7. 培養(yǎng)一至三周后可摘取接種的腫瘤組織,。

注3: 若為血管生成研究，應注射含VEGF及heparin的A膠,，以促進血管生成,。約三天后，可摘取含有新血管生成的腫瘤組織,。