PCR,，qPCR,，dPCR分別是什么?有什么區(qū)別?

　　PCR，qPCR,，dPCR分別是什么嗎?這些東西,，在生物行業(yè)里見的比較多，我們生物行業(yè)的從業(yè)人員懂得應(yīng)該多一些,。PCR技術(shù),，在二十世紀八十年代被發(fā)明。現(xiàn)在DNA擴增已成為生物學研究的基礎(chǔ),。96孔板供應(yīng)天津本生告訴大家,，在過去的三十年中，這項經(jīng)典技術(shù)已得到不斷改進,，以解決研究中的新問題和新需求,。從經(jīng)典PCR，實時定量PCR到當前的數(shù)字PCR,，PCR技術(shù)在不斷變化,，但從未消失。如今,，PCR技術(shù)已經(jīng)從實驗室中分離出來,，在遺傳鑒定和疾病診斷中發(fā)揮了巨大作用，并且在日益廣闊的領(lǐng)域中具有新的生命力,。

　　PCR方法:

　　PCR的原理在這里不需要進一步解釋,。多年來，研究人員基于此開發(fā)了一系列衍生技術(shù),。當前的PCR方法可分為三類：終點PCR,，qPCR和dPCR。

　　終點PCR:

　　端點PCR是原始,，簡單的PCR方法,，并且今天仍然被廣泛使用。 PCR反應(yīng)完成后,，用戶只能通過凝膠電泳,，毛細管電泳等方法檢測產(chǎn)物。終點PCR本身無法量化,，因為反應(yīng)產(chǎn)生的DNA數(shù)量可能無法反映初始情況,。例如，不同樣品和序列之間的擴增效率存在差異,。

　　qPCR和dPCR:

　　研究人員已經(jīng)通過兩種方式克服了定量PCR分析的挑戰(zhàn)：實時定量PCR(qPCR)和數(shù)字PCR(dPCR),。 qPCR主要使用插入染料或熒光探針(例如TaqMan)。通過監(jiān)測PCR期間的熒光強度，可以比較多個樣品的DNA水平,。數(shù)字PCR(dPCR)的基本工作原理很簡單,。先將樣品分為多個PCR反應(yīng)，每個反應(yīng)多包含一個模板,。然后通過對陽性和陰性反應(yīng)進行計數(shù)來確定初始樣品中模板分子的數(shù)量,。

　　盡管qPCR和dPCR都能夠定量樣品中的核酸，但它們有一個重要的區(qū)別,。 qPCR只能實現(xiàn)相對定量(例如,，樣品A的目標序列是樣品B的目標序列的兩倍)，除非使用此標準生成標準曲線,。數(shù)字PCR本身是絕對定量的，不需要標準曲線,。另一方面,，qPCR技術(shù)更加成熟，市場上有大量商業(yè)產(chǎn)品可供選擇,。 dPCR仍然是小的新鮮肉,。它不如qPCR廣泛使用且價格昂貴。與dPCR相比,，qPCR更適合于高通量分析,，并且動態(tài)范圍廣。

　　DPCR通常更準確,。 qPCR可以輕松區(qū)分兩倍的濃度差異(例如5個拷貝和10個拷貝),，但是面對小的差異，它卻較弱,。 dPCR理論上可以識別相差少于20%的拷貝數(shù),，例如5和6拷貝。該準確度對于量化涉及染色體重排的基因的拷貝數(shù)或量化癌癥患者血液中的循環(huán)生物學指標特別有用,。由于dPCR相當于在反應(yīng)結(jié)束時稀釋樣品并讀取數(shù)據(jù),，因此dPCR比qPCR對抑制劑的抵抗力更高。

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