蛋白酶 K(Proteinase K)是一種廣譜絲氨酸蛋白酶,蛋白酶 K于1974年在fungus Engyodontium album的提取物中發(fā)現(xiàn),。能合成該種蛋白酶的微生物能在以角蛋白(Keratin)作為碳源和氮源的環(huán)境中生長,，說明該酶可以消化角蛋白,，因此被稱為“蛋白酶 K”,。蛋白酶K由一條肽鏈組成,，含有277個氨基酸，該蛋白的相對分子量~28.9kDa,，蛋白酶K是一種穩(wěn)定且具有高活性的絲氨酸蛋白酶,。晶體和分子結(jié)構(gòu)研究證據(jù)表明該酶屬于枯草素家族，具有活性位點催化三聯(lián)體(Asp39-His69-Ser224),。蛋白酶K家族包含了各種由革蘭氏陰性細菌,、酵母及真菌分泌的細胞內(nèi)肽酶。
    蛋白酶K具有非常穩(wěn)定的蛋白結(jié)構(gòu),、超高的蛋白水解活性以及廣泛的底物特異性,，偏好于帶有脂肪族及芳香烴的肽鏈，能優(yōu)先分解與含硫氨基酸,、疏水性氨基酸,、芳香族氨基酸的羧基端連接的肽鍵。與其它的蛋白酶相比較,，蛋白酶在一系列廣泛的環(huán)境中均穩(wěn)定：pH,，緩沖鹽，去污劑（SDS）以及溫度,。如：該酶的活力不會被尿素,、SDS和EDTA等變性劑抑制，在高溫,、高鹽或較高的pH等條件下,，蛋白酶K仍能保持非常高活力。因該酶可以在較廣的pH范圍(4～12.5)內(nèi)及高溫(50～70℃)均有活性,，在0.1-0.5% SDS存在的情況下,，蛋白酶K可保持活性，在不損害分離DNA完整性的前提下,，可以消化DNA制劑中的多種蛋白質(zhì)和核酸酶,。
蛋白酶K /國家標(biāo)準:
《蛋白酶K》（GB/T 34793-2017）是2018年5月1日實施的一項中華人民共和國國家標(biāo)準，歸口于中國標(biāo)準化研究院,?！兜鞍酌窴》（GB/T 34793-2017）規(guī)定了蛋白酶K產(chǎn)品的術(shù)語和定義,、技術(shù)要求、試驗方法,、檢驗規(guī)則,、標(biāo)志、包裝,、運輸及貯存,。《蛋白酶K》（GB/T 34793-2017）適用于生化試劑蛋白酶K產(chǎn)品的生產(chǎn)和檢測,。
蛋白酶K生產(chǎn)過程中的挑戰(zhàn)：
①表達量低：由于蛋白酶K能夠非特異性的降解大多數(shù)蛋白,，因此在使用微生物表達生產(chǎn)該蛋白時，其表達的蛋白酶K可以對表達宿主中的有功能的蛋白進行水解,，造成表達宿主不能持續(xù)的表達該蛋白,，因此蛋白酶K的表達量很低。而篩選高表達量蛋白酶K的表達系統(tǒng)或菌株,，需要花費大量的精力和較長的時間,。
②不穩(wěn)定性：雖然蛋白酶K可以在高溫、高鹽或較高的pH等苛刻的條件下保持很高的活性,，但是該酶可以自己酶解自己,，在無保護劑時，在37℃條件下很難長期穩(wěn)定保存,。
③該酶易沉淀：在制備蛋白酶K的凍干粉時,，為了保證凍干粉中蛋白酶K的固含量維持在一個比較大的水平，通常需要在高濃度時加入凍干保護劑,，然而在蛋白酶K濃度達到20mg/mL或者以上時,，該酶很容易聚集形成沉淀，這給蛋白酶K的高固含量凍干造成了極大的挑戰(zhàn),。
④生產(chǎn)投入大：在大規(guī)模發(fā)酵時,，會產(chǎn)生大量色素和宿主核酸的殘留，簡單的純化工藝很難除去這些雜質(zhì),，而使用復(fù)雜的純化工藝則會降低了回收率并且使生產(chǎn)成本加大,。蛋白酶K具有很強的蛋白水解活性，能夠?qū)嶒炇一蜍囬g使用到的其它酶或蛋白水解,，所以生產(chǎn)蛋白酶K需要專門的產(chǎn)地,、儀器設(shè)備及配套設(shè)施。
    蘇州阿爾法生物提供的生物試劑包括天根試劑盒,、碧云天試劑,、蛋白酶K、轉(zhuǎn)染試劑,、elisa試劑等應(yīng)用于細胞生物學(xué),、分子生物學(xué),、免疫組化學(xué)等，同時提供實驗室儀器設(shè)備,、實驗耗材供應(yīng)服務(wù),。