產(chǎn)品簡介：

本試劑盒適用于檢測氣管分泌物拭子、肺組織等樣本中的牛副結(jié)核分枝桿菌,，用于牛副結(jié)核分枝桿菌感染的輔助診斷,，其檢測結(jié)果僅供參考。

產(chǎn)品特點：

一,、嚴格的質(zhì)控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制,，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量，讓您的檢測結(jié)果更可信,。

二,、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化，具有出色的靈敏度,，能夠檢測到極微量的牛副結(jié)核分枝桿菌核酸,，不放過任何潛在的感染風(fēng)險。

三,、便捷操作

綜合各項指標特性,，研發(fā)出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結(jié)果分析,，每一步都有清晰的操作指南,，即使是新手也能輕松上手。

四,、多樣的檢測驗證樣本

該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測驗證,，適用于氣管分泌物拭子、肺組織等多種常見樣本,，滿足不同的檢測需求,。

五、個性化定制服務(wù)

專業(yè)的研發(fā)團隊可為您提供個性化的定制服務(wù),，根據(jù)您的特殊需求進行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整,，為您提供更貼合實際的檢測方案,。

六、豐富的產(chǎn)品線

除了牛副結(jié)核分枝桿菌(MPB)熒光PCR檢測試劑盒,，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒,，滿足您在不同領(lǐng)域的檢測需求。

七,、完善的售前售后服務(wù)

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務(wù)團隊,，在您購買前為您提供詳細的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題,，讓您無后顧之憂,。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒，可滿足一定規(guī)模的檢測需求,。

檢測方法

實時熒光PCR,，具有快速、準確,、靈敏等優(yōu)點,。

適用儀器

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P,、LightCycler,、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀,。

標本采集

病死或撲殺動物,，無菌采集肺病變部位或病變/非病變部位交界處的樣品；活動物滅菌棉拭子沾取氣管分泌物,，放入無菌試管中,。

保存和運輸

采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過 24 h；若需長期保存,，應(yīng)放置-70℃以下保存,，凍融不超過 3 次。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

組織樣品：每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g,，手術(shù)-剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨,，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,，8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL滅菌離心管中,；咽-拭子樣品直接取 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中,。

1.2核酸提取

推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的核酸-提取試劑（離心柱法）進行核酸提取，請按照試劑說明書    進行操作,。

2.試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照,；樣品每滿

10 份，多配制 1 份),，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑MPB 反應(yīng)液酶液

用量（樣本數(shù)為 N）19μL1μL

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,，20μL/管。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸,、陽性質(zhì)控品,、陰性質(zhì)控品各取 5μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,，蓋好管蓋,，混勻， 短暫離心,。

4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi),；

4.2設(shè)置好通道、樣品信息,，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL,；

熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE,，ABI 系列儀器請勿選擇

ROX 參比熒光,，選擇 None 即可。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時間收集熒光信號

11 cycle95℃2min否

245 cycles95℃15sec否

60℃30sec是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定（請參照各儀器使用說明書進行設(shè)置,，以分析 ABI7500 儀器為例）

反應(yīng)結(jié)束后自動保存結(jié)果,，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據(jù)實際情況自行調(diào)整,，Start 值可設(shè)在 3～15,、End 值可設(shè)在 5～20，使閾值線位于擴增曲線指數(shù)期,，陰性質(zhì)控品的擴增曲線平直或低于閾值線）,，點擊 Analyze 自動獲得分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤40,，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線,； 陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>40 或無 Ct 值。

5.3質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品：無特異性擴增曲線或無 Ct 值顯示,；

陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)增長期,，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時滿足,，否則實驗視為無效,。

6.檢測方法的局限性

1.樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理,、運送以及保存質(zhì)量有關(guān),；

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

3.陽性對照,、擴增產(chǎn)物泄漏,，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；

4.病原體在流行過程中基因突變,、重組,，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

5.不同的提取方法存在提取效率差異,，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

6.試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果,；

7.本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段,。

注意事項：

1.所有操作嚴格按照說明書進行,；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完-全混勻并短暫離心,；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存,；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊,；

5.使用一次性吸頭,、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理,、試劑配制,、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染,；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器,；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進行處理,。

9.本產(chǎn)品僅供科研,。

選擇我們的牛副結(jié)核分枝桿菌(MPB)熒光PCR檢測試劑盒，就是選擇精準,、高效,、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航,！