酶標聚合物法(labelled dextran polymer,,LDP)法應用了酶標聚合物技術,,如EnVision檢測系統(tǒng),首先將辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標記在葡聚糖聚合物上,,然后再與第二抗體連接而形成EnVision二抗,。
LDP法屬于二步法,,特異性一抗和組織細胞抗原結合后,再用EnVision二抗與抗原抗體復合物中的一抗結合,,最后通過EnVision二抗上的酶參與顯色反應,。
由于EnVision二抗中的聚合物結構的*,可以連接更多的二抗,,使每個多聚物有超過20個位點與di一抗體結合,,聚合物上能標記上的酶數(shù)量較多。因此在顯色時有充足的酶與顯色劑起反應,。
因此LDP法的敏感性高于ABC,、LSAB等方法。此外,,LDP法中的第二抗體沒有生物素的存在,,不會出現(xiàn)ABC、LSAB等方法中含有的生物素與組織中內(nèi)源性生物素起交叉反應的現(xiàn)象,,因此LDP法的非特異性背景染色極低,。
增強聚合物一步法(enhanced polymer one setp,EPOS)法也屬于酶標聚合物法,,和LDP法一樣,,是利用酶標聚合物技術,將辣根過氧化物酶標記在葡聚糖聚合物上,,然后再與di一抗體連接而形成EPOS一抗,。
EPOS法屬于直接法,直接用EPOS一抗特異性和組織細胞抗原結合后,,一抗上的酶參與顯色反應,。由于EPOS一抗中的聚合物上能標記上的酶數(shù)量較多,在顯色時有充足的酶與顯色劑起反應,。因此EPOS法雖然是直接法,,但具有高敏感性。
此外,,EPOS一抗沒有生物素的存在,,不會出現(xiàn)ABC、LSAB等方法中含有的生物素與組織中內(nèi)源性生物素起交叉反應的現(xiàn)象,,背景清晰,。但EPOS一抗種類較少,難以普及,。
催化信號放大(catlyzed signal amplification,,CSA)法是應用一種放大試劑生物素化酪胺,與抗生物素蛋白鏈菌素-生物素-過氧化物酶復合物(streptavidin biotin-HRP)連接,,在過氧化物酶作用下形成大量的生物素沉積物,,再加入抗生物素蛋白鏈菌素-過氧化物酶復合物后,,過氧化物酶與生物素沉積物形成大量的過氧化物酶聚合,聚合的過氧化物酶與顯色劑起反應,。在第三步應用了SABC法的SABC-HRP復合物,,第五步應用了LSAB法的SA-HRP復合物。
由于CSA法加入了催化信號放大試劑,,使信號不斷放大,,因此敏感性比EPOS一步法、EnVision二步法,、PAP/APPAP法,、LSAB(S-P)法和SABC等方法高。特別適用于檢測較弱的組織抗原,。
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